血液試料の統合的分析を目指したナノ転写チップの開発

开发用于血液样本集成分析的纳米转移芯片

• 批准号: 07J08125
• 负责人: 末吉 健志
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J08125/
• 关键词: マイクロチップ分析; 血液分析; マイクロチップ電気泳動; オンライン試料濃縮; トランジェント-トラッピング; ナノ転写チップ; アミノ酸分析; ステロイド分析; トランジェントトラッピング; フローサイトメトリー; ミセル動電クロマトグラフィー

血液中の微量成分を分析するためには、nMレベルの高感度分析が必要となる。これを実現するために、昨年度の研究で新規に開発したオンライン試料濃縮法である、トランジェントートラッピング法を生体成分分析に適用した。分析対象としては、ごく微量でも人体に多大な影響を与えるアンドロステロン・プロゲステロンなどのステロイド類や、健康指標として期待されているフェニルアラニン・ロイシンなどのアミノ酸類を選択した。まず、マイクロチップ上で分析を行う前に、キャピラリー電気泳動にて基礎的性能評価を行ったところ、疎水性の高いステロイド類についてはそのままで、アミノ酸類については疎水性の蛍光試薬を用いた誘導体化により、既存の分析法と比較して短時間で高感度かつ高分離能で分析することが可能になった。このとき、わずか5pMの誘導体化アミノ酸を検出可能であったことから、血液中の微量のアミノ酸については、十分に分析可能であると考えられる。さらに、これをマイクロチップ電気泳動に適用し、150倍の高感度化とベースライン分離をわずか30秒で達成した。さらに、血液中のタンパク質等の壁面への吸着の影響を防ぐために、キャピラリー内壁をpoly(vinylpyrrolidone)を用いてコーティングし、電気浸透流が発生しない条件下においてもトランジェントートラッピングが可能であることも確認できた。以上の結果から、昨年開発した血球分離デバイスと組み合わせることで血液の統合的分析が可能となると考えられる。

为了分析血液中的痕量成分，需要对NM水平进行高度敏感的分析。为了实现这一目标，我们将瞬态应用于去年研究中新开发的在线样本浓度方法的捕获方法，以生物成分分析。作为分析的靶标，类固醇（如雄激素和孕酮），即使在很少的量中也对人体产生显着影响，并且选择了苯丙氨酸和亮氨酸等氨基酸，预计将是健康指标。首先，在对微芯片进行分析之前，使用毛细管电泳进行了基本性能评估。高度疏水类固醇被衍生化，同时使用疏水性荧光试剂衍生化氨基酸，这使得与现有分析方法相比，在较短的时间内以高灵敏度和高分辨率进行分析是可能的。目前，仅检测到仅下午5点的衍生化氨基酸，因此可以彻底分析血液中的痕量氨基酸。此外，它应用于微芯片电泳，在短短30秒内实现了150倍的敏感性和基线分离。此外，为了防止血液中蛋白质等吸附在壁表面上的影响，毛细管的内壁用聚（乙烯基吡咯烷酮）覆盖，并且可以证实，即使在没有发生电流流的情况下，即使在没有发生电流流动的条件下，也可能存在瞬态捕获。基于上述结果，人们认为，与去年开发的血细胞分离装置结合使用，可以进行综合的血液分析。

项目成果

マイクロチップ電気泳動における新規オンライン試料濃縮法:トランジェントートラッピング法の開発(2), 他

新型微芯片电泳在线样品浓缩方法：瞬态捕获法的发展（2）等

• 发表时间: 2008
• 作者: 末吉健志;北川文彦;大塚浩二;他
• 通讯作者: 他