血液試料の統合的分析を目指したナノ転写チップの開発

开发用于血液样本集成分析的纳米转移芯片

• 批准号: 07J08125
• 负责人: 末吉 健志
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J08125/
• 关键词: マイクロチップ分析; 血液分析; マイクロチップ電気泳動; オンライン試料濃縮; トランジェント-トラッピング; ナノ転写チップ; アミノ酸分析; ステロイド分析; トランジェントトラッピング; フローサイトメトリー; ミセル動電クロマトグラフィー

血液中の微量成分を分析するためには、nMレベルの高感度分析が必要となる。これを実現するために、昨年度の研究で新規に開発したオンライン試料濃縮法である、トランジェントートラッピング法を生体成分分析に適用した。分析対象としては、ごく微量でも人体に多大な影響を与えるアンドロステロン・プロゲステロンなどのステロイド類や、健康指標として期待されているフェニルアラニン・ロイシンなどのアミノ酸類を選択した。まず、マイクロチップ上で分析を行う前に、キャピラリー電気泳動にて基礎的性能評価を行ったところ、疎水性の高いステロイド類についてはそのままで、アミノ酸類については疎水性の蛍光試薬を用いた誘導体化により、既存の分析法と比較して短時間で高感度かつ高分離能で分析することが可能になった。このとき、わずか5pMの誘導体化アミノ酸を検出可能であったことから、血液中の微量のアミノ酸については、十分に分析可能であると考えられる。さらに、これをマイクロチップ電気泳動に適用し、150倍の高感度化とベースライン分離をわずか30秒で達成した。さらに、血液中のタンパク質等の壁面への吸着の影響を防ぐために、キャピラリー内壁をpoly(vinylpyrrolidone)を用いてコーティングし、電気浸透流が発生しない条件下においてもトランジェントートラッピングが可能であることも確認できた。以上の結果から、昨年開発した血球分離デバイスと組み合わせることで血液の統合的分析が可能となると考えられる。

为了分析血液中的微量成分，需要nM级别的高灵敏度分析。为此，我们将去年研究中新开发的在线样品浓缩方法瞬态捕获法应用于生物成分分析。分析对象是雄酮、黄体酮等类固醇，即使微量也对人体产生显着影响；以及苯丙氨酸、亮氨酸等有望作为健康指标的氨基酸。首先，在对微芯片进行分析之前，我们使用毛细管电泳进行了基本性能评估。我们发现，高疏水性类固醇保持原样，而氨基酸则使用疏水性荧光试剂进行衍生化，这使得使用疏水性荧光试剂进行分析成为可能。与现有分析方法相比，可在更短的时间内实现高灵敏度和高分辨率。此时，仅检测到5pM的衍生氨基酸，因此认为可以充分分析血液中的微量氨基酸。此外，通过将其应用于微芯片电泳，他们在短短 30 秒内实现了 150 倍的灵敏度和基线分离。此外，为了防止血液中的蛋白质吸附到管壁上，毛细管的内壁涂有聚乙烯吡咯烷酮，即使在不发生电渗流的条件下也可以进行瞬时捕获。确认。基于以上结果，认为通过与去年开发的血细胞分离装置相结合，可以实现血液的综合分析。

项目成果

マイクロチップ電気泳動における新規オンライン試料濃縮法:トランジェントートラッピング法の開発(2), 他

新型微芯片电泳在线样品浓缩方法：瞬态捕获法的发展（2）等

• 发表时间: 2008
• 作者: 末吉健志;北川文彦;大塚浩二;他
• 通讯作者: 他