植物ウイルスベクターによる内在性遺伝子の転写抑制系の確立に向けた基盤研究

旨在利用植物病毒载体建立内源基因转录抑制系统的基础研究

基本信息

批准号：
07J03243
负责人：
太田垣駿吾
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、遺伝子導入以外の方法で遺伝子の発現を特異的に改変可能な育種法を開発するため、Cucumber mosaic virus(以下、CMV)に由来するウイルスベクターを用い、標的遺伝子に対して特異的に転写抑制型ジーンサイレンシング(Transcriptional Gene Silencing ; TGS)を誘導する系の開発を行っている。申請者はこれまで、カリフラワーモザイクウイルス35Sプロモーターの転写制御下でGFPを発現しているNicotiana benthamiana形質転換体に対して、35Sプロモーター配列を組み込んだベクターをゲノムの構成要素として持つキュウリモザイクウイルス(CMV)を2本鎖RNAの供給源として感染させることで、RdDMによるGFP遺伝子のTGSが誘導される系を確立している。さらに、TGS誘導個体から得た自殖第1世代(S1植物体)を解析したところ、接種時にCMVベクターに挿入した35Sプロモーター配列の部位により、TGSの維持効率が大きく異なる場合があることを見出した。そこで本年度は、S1植物体においてDNAのメチル化およびTGSが維持されていた個体をさらに自殖させることで自殖第2および第3世代(S2およびS3植物体)を得、それらの個体におけるDNAのメチル化およびGFP遺伝子のTGSの維持の有無を解析した。その結果、S2およびS3個体ではCMVベクターに挿入した配列の違いに関わらず、S1植物体で見られたGFP遺伝子の発現抑制が安定して維持されていた。さらにS2植物では、転写因子結合配列の一つであるAs-1領域を中心に高頻度のDNAのメチル化が検出された。以上より、CMVベクターを介して誘導されたゲノム中に挿入された35Sプロモーター領域のメチル化及びGFP遺伝子のTGSは2度の自殖を経ても安定して維持されることが明らかになった。

在这项研究中，为了开发一种可以在遗传引入以外的方法中特异性地改变基因的繁殖定律，该方法使用来自黄瓜马赛克病毒（CMV）的病毒载体（CMV）。指导转录抑制类型基因沉默（TGS）。申请人到目前为止，具有35S启动子序列的Nicotiana Benthamiana转录转换为35S启动子序列，作为CALIAL摩在35S启动子的基因组成分成分的基因组成分成分。，建立一个由RDDM诱导GFP基因的TGS的系统。此外，当从TGS诱导的个体获得的第一代自胎（S1植物体）分析时，TGS的维持效率可能会大大变化，这取决于在疫苗接种期间插入的35S启动子序列的位置。因此，在这个财政年度，DNA的甲基化和TG在S1植物中进一步产生，获得了第二代和第三代（S2和S3蔬菜），并在这些个体中进行了DNA。基因。结果，无论插入CMV载体中的序列如何，S2和S3个体都可以稳定地保持在S1植物中GFP基因的表达。此外，在S2植物中，检测到高频DNA甲基化，以AS-1区为中心，AS-1区域是转录因子结合序列之一。结果，很明显，通过CMV载体引导的基因组中的35S启动子区域的甲基化和GFP基因TGS的甲基化即使在两个自breeded后也能保持稳定。