リンパ管新生の検討と癌由来の血管、リンパ管新生抑制遺伝子の探索

检查淋巴管生成并寻找癌源性血管和淋巴管生成抑制基因

基本信息

批准号：
07J02800
负责人：
齊藤幸裕
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J02800/
关键词：
血管新生リンパ管新生遺伝子治療癌転移

项目摘要

癌の増殖、転移には癌由来の血管、リンパ管新生因子が関与するため、これらの制御は予後向上のための治療標的となる。そこで我々は癌由来の抗血管、リンパ管新生制御因子を探索するため研究を行った。マウス肺癌LL/2細胞よりcDNAライブラリーを構築し、独自のHVJ-Eを用いたHigh Throughput Functional Screeningにより増殖抑制候補遺伝子cold shock domain protein A(CSDA)を特定した。CSDAは血管内皮細胞(HAEC)、リンパ管内皮細胞(LEC)両方の増殖能を抑制した(c-fos promoter assay;84.9%inhibition in HAEC,97.3%inhibition in LEC under10%FBS condition)。正常組織では骨格筋と心臓に特異的に高発現し、血管・リンパ管内皮細胞にもわずかに発現していることを確認した。細胞内局在は主として核であった。Deletion mutantによる検討により、この増殖抑制活性にはcold shock domainが必須であることを確認した。CSDAの増殖抑制の作用機序として、既報のHypoxia inducible factor-1の作用抑制に加えて、serum response region(SRE)を抑制することを確認した(SRE assay:45.1%inhibition in HAEC,97.0%inhibition in LEC under10%FBS condition)。生体でのCSDAの作用を確認するために、マウス背部皮下にLL/2細胞を移植した担癌マウスモデルにCSDAを反復して遺伝子導入すると、腫瘍周辺の血流低下と転移減少の傾向を認めた。CSDAは血管、リンパ管新生を同時に抑制しうる新規の制御遺伝子であり、癌治療の次世代の治療戦略となりうることが示唆された。さらに我々はCSDAが正常心筋、骨格筋に発現していることに着目した。検討の結果CSDAは心筋、骨格筋において血管新生の内因性制御因子として機能していることが明らかとなり、これをノックダウンすることで増殖因子を添加することなしで、血管新生を誘導することが可能なことを見出した。またCSDAは癌化の過程で、白血病、子宮癌、肺癌、大腸癌、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌で発現することがわかった。このことはCSDAが癌の発生、進展に機能を有していることを示唆しており、新たな腫瘍マーカー、悪性度診断マーカーとなりうる可能性があることを示している。

由于癌源性血管和淋巴管生成因子参与癌症的生长和转移，因此控制这些因子是改善预后的治疗目标。因此，我们进行了研究以寻找癌症源性抗血管生成和淋巴管生成调节因子。我们构建了小鼠肺癌 LL/2 细胞的 cDNA 文库，并通过使用我们原创的 HVJ-E 进行高通量功能筛选，鉴定了生长抑制候选基因冷休克结构域蛋白 A (CSDA)。 CSDA抑制血管内皮细胞(HAEC)和淋巴内皮细胞(LEC)的增殖能力(c-fos启动子测定；在10%FBS条件下HAEC抑制84.9%，LEC抑制97.3%)。在正常组织中，已证实其在骨骼肌和心脏中特异性高表达，在血管和淋巴管内皮细胞中也有少量表达。细胞内定位主要是细胞核。使用缺失突变体的研究证实冷休克结构域对于这种生长抑制活性至关重要。 CSDA抑制增殖的作用机制被证实除了先前报道的缺氧诱导因子-1抑制作用外，还通过抑制血清反应区（SRE）（SRE测定：HAEC中45.1%抑制，LEC under10抑制97.0%） %FBS 条件）。为了证实CSDA在体内的作用，当将CSDA重复导入荷瘤小鼠模型（将LL/2细胞皮下移植到小鼠背部）时，肿瘤周围血流减少的趋势，并且减少观察到转移。 CSDA是一种新型调控基因，可以同时抑制血管和淋巴管生成，这表明它可以作为下一代癌症治疗策略。此外，我们重点关注 CSDA 在正常心肌和骨骼肌中表达的事实。研究结果表明，CSDA 作为心脏和骨骼肌血管生成的内源性调节剂，通过抑制它，可以在不添加生长因子的情况下诱导血管生成，我发现了这种可能性。 CSDA还被发现在白血病、子宫癌、肺癌、结直肠癌、恶性淋巴瘤、恶性黑色素瘤、甲状腺癌的癌变过程中表达。这表明CSDA在癌症的发生和进展中具有作用，并表明其有潜力作为新的肿瘤标志物和恶性肿瘤诊断标志物。