マリネスコ・シェーグレン症候群の疾患座局座位同定と原因遺伝子検索

Marinesco-Sjögren 综合征的发病位点鉴定和致病基因搜索

基本信息

批准号：
18791284
负责人：
山田浩喜
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791284/
关键词：
脊髄小脳変性症白内障分子遺伝学変異解析

项目摘要

マリネスコ・シェーグレン症候群(MSS)は、両眼性白内障、脊髄小脳変性などを来す常染色体劣性遺伝性の稀な疾患である。本研究申請時、原因遺伝子は単離されていなかったため、申請者らが経過観察を行ってきた本疾患の日本人家系について疾患遺伝子座を確定し、責任遺伝子を単離することを目的としていた。しかし、2005年12月に欧州のグループからMSSの原因にSIL1遺伝子の機能喪失性変異が関与しているとの新知見が報告され(Senderek, et. al. Nat Genet. 37, 2005)、本研究の対象の日本人家系においても同遺伝子が関与している可能性は十分考えられるため、連鎖解析ではなくSIL1遺伝子の変異解析を優先させた。申請者らは、文書でインフォームドコンセントを得た、本疾患の罹患者3同胞と非罹患者1同胞とその両親から採血し、ゲノムDNAを抽出精製した。そしてSIL1遺伝子の全翻訳領域をカバーするプライマーを作成し、PCRでDNAを増幅させ、シークエンスを行った。罹患者3同胞のSIL1遺伝子のエクソン6に一見5塩基欠失ホモ接合体とみられる変化があり、非罹患者1同胞にはSIL1遺伝子に異常はみられなかった。父親にエクソン6の5塩基欠失ヘテロ接合体を認め、このため母親にも父親と同様の変異がみられると予想したが、母親のエクソン6を含むSIL1遺伝子全体のシークエンスには異常がみられなかった。そこで多型解析し親子関係を確認した後、更に全対象のエクソン6のDNAコピー数をリアルタイムPCRで解析し、母親と罹患者3同胞が少なくともエクソン6を含む領域に欠失をもつことを証明した。これらより、本研究の対象の罹患者はSIL1遺伝子にエクソン6の5塩基欠失ヘテロ接合体と、少なくともエクソン6を含む領域の欠失を合わせもつ複合ヘテロ接合遺伝子であることがわかった。現在、論文作成中である。

Marinesco-Sjögren 综合征 (MSS) 是一种罕见的常染色体隐性遗传疾病，会导致双侧白内障和脊髓小脑变性。在申请本研究时，尚未分离出致病基因，因此目的是确定申请人一直在跟踪的患有该疾病的日本家庭中的致病基因并分离出致病基因。然而，2005 年 12 月，一个欧洲小组报告了新的发现，即 SIL1 基因的功能丧失突变与 MSS 的病因有关（Senderek, et. al. Nat Genet. 37, 2005），而这本书因为它由于本研究的对象日本家族很可能涉及相同的基因，因此我们优先考虑 SIL1 基因的突变分析而不是连锁分析。申请人获得了书面知情同意书，并采集了三名受影响的兄弟姐妹和一名未受影响的兄弟姐妹及其父母的血液，并提取和纯化了基因组 DNA。然后，他们创建了覆盖 SIL1 基因整个翻译区域的引物，使用 PCR 扩增 DNA，并进行测序。三个受影响的兄弟姐妹的 SIL1 基因外显子 6 发生了变化，乍一看似乎是纯合的 5 个碱基缺失，而一个未受影响的兄弟姐妹的 SIL1 基因没有异常。父亲被发现是杂合子，外显子 6 中有 5 个碱基缺失，因此我们预计母亲与父亲具有相同的突变，但发现母亲的整个 SIL1 基因（包括外显子 6）的序列没有异常。通过多态性分析确认亲子关系后，我们进一步使用实时PCR分析了所有受试者的6号外显子DNA拷贝数，证明母亲和三个受影响的兄弟姐妹至少在含有6号外显子的区域存在缺失。做过。这些结果表明，本研究中针对的受影响个体是外显子 6 中 5 核苷酸缺失的杂合子，并且是 SIL1 基因中至少包括外显子 6 的区域中的复合杂合子。该论文目前正在准备中。