ビブリオ属細菌の環境適応機構の包括的解析

弧菌环境适应机制综合分析

基本信息

批准号：
18790308
负责人：
黒田照夫
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ビブリオ属細菌の環境適応機構を理解するために、以下の二つの面から解析を行った。1.抗菌薬トランスポーター(多剤排出ポンプ)の遺伝子クローニングおよび抗菌薬耐性変異株の作成グラム陰性菌では重要であると考えられているRND型多剤排出ポンプについて、腸炎ビブリオ、Vibrio cholerae non-01のゲノム上に推定される計18個をクローニングし、抗菌薬高感受性大腸菌に発現させて、その機能を解析した。その一部については論文で報告した。腸炎ビブリオについてはそれら全て破壊した12重破壊株を作成した。この株は種々の抗菌性物質に対して強い感受性を示したので、12個のRND型多剤排出ポンプをこの株に発現させて解析を行った。その結果、計9個のものが実際に宿主細胞に抗菌物質耐性を与えることがわかった。また12重破壊株では細胞の鉄獲得において重要なシデロフォアの産生量が低下していることを新たに見出した。これらの成果の一部は、計4つの学会で報告した。2.腸炎ビブリオのNa^+耐性に関わる輸送系の探索Na^+/H^+アンチポーター以外のNa^+耐性に関係する輸送系と予想した呼吸鎖Na^+ポンプについてその遺伝子破壊株の構築を試みた。理由は不明だが、Na^+/H^+アンチポーターと呼吸鎖Na^+ポンプを両方欠損した株は得られなかった。このことは両者が機能しないことは細胞にとって致死的である可能性が高いことを意味する。そこですでに得られている呼吸鎖Na^+ポンプを欠損した株について解析を行った。この株は栄養培地でさえも生育の遅延が見られ、呼吸鎖Na^+ポンプの重要性があらためて示された。この株はNa^+感受性が幾分増大していたが、劇的な変化とは言いがたいものであった。やはり両者の破壊株を得ることが重要であると考えられる。現在、別のアプローチから目的の遺伝子破壊株の構築を試みている。

为了了解弧菌的环境适应机制，我们从以下两个方面进行了分析。 1. 抗菌药物转运蛋白（多药外排泵）的基因克隆和抗菌药物耐药性突变菌株的创建针对革兰氏阴性菌中被认为重要的RND型多药外排泵，我们对副溶血弧菌、非霍乱弧菌进行了研究- 在01基因组上克隆了总共18个推定基因，这些基因在抗菌高度敏感的大肠杆菌中表达，并分析了它们的功能。其中一些在报纸上进行了报道。对于副溶血性弧菌，我们创建了 12 倍破坏菌株，其中所有菌株均被破坏。由于该菌株对多种抗菌物质表现出强烈的敏感性，我们在该菌株中表达了12个RND型多药外排泵并进行了分析。他们发现总共九种实际上赋予宿主细胞抗菌素耐药性。此外，我们新发现，在 12 倍破坏的菌株中，铁载体的产生减少了，铁载体对于细胞铁的获取很重要。其中一些结果在总共四次学术会议上进行了报告。 2. 寻找副溶血性弧菌中与Na^+抵抗相关的转运系统探索除Na^+/H^+逆向转运蛋白和呼吸链Na^+泵之外的与Na^+抵抗相关的转运系统，其中我尝试构建它。由于未知的原因，我们无法获得同时缺乏Na^+/H^+逆向转运蛋白和呼吸链Na^+泵的菌株。这意味着两者都无法发挥作用可能对细胞是致命的。因此，我们分析了已经获得的缺乏呼吸链Na^+泵的菌株。即使在营养培养基中，该菌株的生长也被延迟，再次证明了呼吸链Na^+泵的重要性。该菌株的 Na^+ 敏感性有所增加，但这种变化很难说是显着的。人们认为获得两者的破坏性库存很重要。目前，我们正在尝试使用不同的方法构建所需的基因破坏菌株。