ブルセラ属菌の胎盤感染機構の解析

布鲁氏菌胎盘感染机制分析

基本信息

批准号：
18790298
负责人：
度会雅久
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790298/
关键词：
感染症細菌

项目摘要

ブルセラ属菌は人獣共通感染症の一つであるブルセラ症の原因菌であり、妊娠動物に感染した場合、不妊あるいは流死産といった繁殖障害を引き起こす。細胞内寄生菌であり、妊娠動物において、胎盤の栄養膜巨細胞(trophoblast giant cell: TGC)に特異的に侵入し増殖することが報告されている。このことが流産の引き金になっていると考えられるが、詳細なメカニズムについては不明な点が多い。そこで本研究では、ブルセラ属菌の細胞侵入に関わるTGC側分子を同定し、その分子を介した菌の細胞侵入について検討を行った。ラットにTGCを免疫し、TGCに対するモノクローナル抗体を約3000個作製した。この中から、Brucella abortusのTGCへの侵入を有意に阻害する抗体を選別し、その抗体が認識する分子を質量解析によって同定した。また、siRNAならびに発現ベクターを用いた系で、この分子をノックダウン、あるいは過発現させたTGCを作製し、菌の感染率について検討した。さらに、流産モデルマウスにこの抗体を投与し、感染による流産が阻止されるか否かを検討した。B. abortusの細胞侵入を阻害した抗体は、Hsc70を認識する抗体である事が判明した。Hsc70をノックダウンさせたTGCでは、B. abortusの細胞侵入が阻害され、逆に過発現させたTGCでは侵入効率が上昇した。また、この抗体の投与により、マウスにおける流産は阻止されることが認められた。以上の結果から、Hsc70がB. abortusの細胞侵入に関与する分子であることが示唆された。

布鲁氏菌属是布鲁氏菌病的致病细菌，一种人畜共患病，当被怀孕的动物感染时，它会引起生殖疾病，例如不育或堕胎。它是一种细胞内寄生虫，据报道是在怀孕的动物中专门侵入和增殖的滋养肉细胞巨细胞（TGC）。人们认为这是流产的触发因素，但是关于详细机制有许多未知数。因此，在这项研究中，我们确定了参与布鲁氏菌细胞浸润的TGC侧分子，并通过该分子检查了细菌的细胞侵袭。用TGC对大鼠进行免疫，并制备大约3,000个针对TGC的单克隆抗体。从这些中，选择了明显抑制布鲁氏菌进入TGC的抗体，并通过质量分析鉴定出抗体识别的分子。此外，还产生了TGC，其中使用siRNA和表达载体系统将该分子击倒或过表达，并检查了细菌的感染率。此外，该抗体是针对堕胎模型模型小鼠的，以确定是否防止了感染引起的流产。已经发现，抑制流产细胞浸润的抗体是一种识别HSC70的抗体。在击倒HSC70的TGC中，抑制了堕胎芽孢杆菌的细胞侵袭，并且在过表达的TGC中倒置效率提高。还发现该抗体的给药阻止了小鼠流产。以上结果表明，HSC70是参与Abortus细胞进入的分子。