マウス胚神経管における葉酸受容体の発現調節機構およびその細胞系譜の解析

小鼠胚胎神经管叶酸受体表达及其细胞谱系调控机制分析

• 批准号: 18790141
• 负责人: 才津 浩智
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790141/
• 关键词: 脳・神経; 発生・分化; 神経管奇形; 葉酸; 先天異常

平成18年度の研究で,神経管におけるFbp1のシス調節領域を1.1kbまで絞りこむことに成功した。そこで平成19年度は,Fbp1のシス調節領域に結合する調節因子を,(1)得られたシス調節領域のシークエンスをもとに,データベースを利用してこの領域に結合する候補遺伝子を検索する,(2)発現パターンの類似性から候補遺伝子を検索する,という2つのアプローチを用いて同定を試みた。遺伝子発現の類似性から,WntシグナルがFbp1の発現調節を行っている可能性を考えた。Wntシグナルは二分脊椎マウスにおいてその関与が明らかとなっている。しかしながら,Wntシグナルに対する反応性を,繊維芽細胞を用いたルシフェラーゼアッセイで検討したところ,同定したFbp1シス調節領域は活性化されなかった。また,同定したシス領域にはShhシグナルのmediatorである転写因子Gliが結合する配列が認められた。しかしながら,この配列に変異を導入してもLacZの発現に変化は認められなかった。また,同定したシス調節領域1.1kbは,マウスとヒトで高度に保存されていることから,この保存領域がヒトFbp1の発現を調節している可能性が十分考えられた。実際に相同なヒトゲノムを用いてエンハンサー活性の有無を検討したところ,神経管での発現は認められなかったが,神経堤細胞での発現は認められた。この結果から,この保存領域がヒトFbp1の神経管での発現を調節しているかは明らかでなかったが,少なくとも神経堤細胞での発現を調節している可能性が強く示唆された。

在我们2006年的研究中，我们成功地将神经管中Fbp1的顺式调控区域缩小到1.1 kb。因此，2007年，我们通过以下方式研究了与Fbp1的顺式调控区结合的调控因子：（1）根据获得的顺式调控区的序列，利用数据库搜索与该区域结合的候选基因；候选基因采用两种方法：（2）根据表达模式的相似性搜索候选基因；基于基因表达的相似性，我们考虑Wnt信号调节Fbp1表达的可能性。脊柱裂小鼠中 Wnt 信号的参与已被揭示。然而，当使用成纤维细胞通过荧光素酶测定检查对 Wnt 信号的反应性时，发现的 Fbp1 顺式调节区并未激活。此外，鉴定出的顺式区域包含与转录因子 Gli 结合的序列，转录因子 Gli 是 Shh 信号的介体。然而，即使在该序列中引入突变，也没有观察到 LacZ 表达的变化。此外，所鉴定的 1.1 kb 顺式调控区在小鼠和人类之间高度保守，表明该保守区可能调控人类 Fbp1 的表达。当我们使用同源人类基因组实际检查增强子活性是否存在时，我们发现在神经管中没有表达，但在神经嵴细胞中表达。尽管从这些结果中尚不清楚该保守区域是否调节神经管中人Fbp1的表达，但强烈表明它至少可能调节神经嵴细胞中的表达。