腎臓の有機カチオン/プロトン交換輸送系を担う機能性分子の同定

负责肾脏有机阳离子/质子交换转运系统的功能分子的鉴定

基本信息

批准号：
18790125
负责人：
井上勝央
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

フルオロキノロン系抗菌剤(FQ)の多くは,主に未変化体として尿中に排泄される。その腎排泄には糸球体ろ過のみならず,近位尿細管での分泌が関与しており,その尿細管上皮細胞における輸送にはトランスポーターの寄与が大きいものと考えられているが,その分子メカニズムについては明らかになっていない。そこで本研究では,MATE1によるFQの輸送の可能性を考え,ラットMATE1(rMATE1)安定発現系を用いて輸送解析を行った。rMATE1による各種FQの輸送を評価した結果,用いたFQ全てにおいて有意な輸送活性が認められた。最も取り込み活性の大きかったnorfloxacin(NFX)を用いて詳細な輸送機能解析を進めた結果,NFX取り込みは顕著な濃度依存性を示し,ミカエリス定数は55.3μMと算出された。この輸送は,MATEの基質であるcimetidine,TEAにより有意に阻害された。しかし,細胞内pH(pHi)を変化させた場合,NFLXの取り込みはほとんど変化が見られず,前年度の検討で示されたpRi依存的なTEA取り込みとは異なる挙動を示した。このことはNFLXが両性物質であるため,H^+と交換輸送されるカチオン性物質(TEA等)と異なり,H^+非依存的に輸送される可能性が考えられる。従って,以上の結果より,FQの近位尿細管刷子縁膜における分泌にMATE1が関与している可能性が示され,その輸送メカニズムはH^+非依存的な促進拡散であることが示唆された。

大多数氟喹诺酮类抗菌剂（FQ）主要以原形形式从尿液中排出。肾脏排泄不仅涉及肾小球滤过，还涉及近曲小管的分泌，转运蛋白被认为对其在肾小管上皮细胞中的转运做出了很大贡献，但其机制尚不清楚。因此，在本研究中，考虑到MATE1进行FQ转运的可能性，我们使用大鼠MATE1（rMATE1）稳定表达系统进行转运分析。通过评估 rMATE1 对各种 FQ 的转运，结果发现所有使用的 FQ 均具有显着的转运活性。使用摄取活性最高的诺氟沙星（NFX）进行详细的转运功能分析，结果，NFX的摄取表现出显着的浓度依赖性，计算出米氏常数为55.3μM。这种转运被西咪替丁（MATE 的底物）和 TEA 显着抑制。然而，当细胞内pH（pHi）改变时，NFLX的摄取几乎没有变化，表现出与前一年的研究中显示的pRi依赖性TEA摄取不同的行为。这是因为NFLX是两性物质，与通过与H^+交换而运输的阳离子物质（TEA等）不同，它可以以不依赖于H^+的方式运输。因此，上述结果表明MATE1可能参与了近端肾小管刷状缘膜的FQ分泌，并表明其转运机制是不依赖于H^+的易化扩散。