トランスグリコシル化反応による糖鎖を分子プローブとした癌治療薬の創製に関する研究

利用转糖基反应产生的糖链作为分子探针创建癌症疗法的研究

基本信息

批准号：
18790011
负责人：
池田剛
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

アグリコン部にspirostane-typeのステロイド骨格を有し、糖鎖部にβ-lycotetraosy1基を持つ配糖体に強いガン細胞増殖抑制活性があるという知見を礎として、より詳細な構造活性相関を調べ、活性に必要なファーマコフォアを明らかにするために、lycotetraosy1配糖体のアグリコン部分のライブラリー構築を行うことを企図した。以下に、平成19年度に得られた知見を記す。1.糖供与体の合成・・・当研究室で展開しているtrans-glycosylation法を応用して、トマト萎凋病菌Fusarium oxysporumからtomatinaseを調製、トマト地上部由来のα-tomatineより74%の収率でlycotetraoseをオリゴ糖鎖として一挙に切り出した。得られたlycotetraoseはアセチル保護し、糖供与体(thioglycoside, fluoride, dipheny1 phosphate)に変換した。2.アグリコンへのグリコシル化…7種のアグリコンとlycotetraosy1 thioglycoside体を用い、NIS、TMSOTfをpromotorとし-40℃にてグリコシル化反応を行った。その結果、16〜52%の収率で非天然型のα結合体として、対応するアグリコン部を有する配糖体を得た。3.β選択性と収率向上の条件検討…Thioglycosideとtigogeninを用い反応温度を検討したところ、40℃に昇温すると、収率29%(α/β=1/5)でβ配糖体を得ることができた。また、糖供与体にfluorideを用いた場合、CP_2HfCl_2、AgClO_4をpromotorとして-40℃でcholesterolとグリコシル化したところ、α配糖体が78%と高収率で得られた。また、糖供与体にdipheny1 phosphateを用い、TMSOTfをpromotorとして-40℃でcholesterolと反応したところ、収率41%(α/β=2/1)でβ配糖体が合成された。以上のことから、α配糖体は、fluoride体を用いると高収率で得られる傾向にあり、β配糖体は、-40℃でdipheny1 phosphateを用いる、または、40℃でthioglycosideを用いることで生成するという知見が得られた。4.得られたlycotetraosy1誘導体のガン細胞抑制試験・・・各種ガン細胞(A549,HepG2,LLC-PK1)を用いて、細胞増殖抑制試験を実施し、構造活性相関を検討した。同じアグリコンの場合、グリコシド結合がα結合に比べβ結合の配糖体の方が強い活性を持つことが判明した。また、アグリコン部はC27steroid骨格に比べcholestane骨格の配糖体に強い活性が有ることが推察された。

基于糖苷配基中具有螺甾烷型类固醇骨架和糖链部分中具有β-糖四糖基的糖苷具有强癌细胞增殖抑制活性的知识，我们研究了更详细的结构-活性关系，以阐明。为了确定该活性所需的药效团，我们计划构建 lycotetraosy1 糖苷的糖苷配基部分文库。 2007 财年的调查结果如下所述。 1.糖供体的合成...番茄酶是利用我们实验室开发的转糖基化方法以番茄枯萎病真菌尖孢镰刀菌为原料，以高速率切出寡糖链来制备番茄酶。获得的糖四糖被乙酰基保护并转化为糖供体（硫代糖苷、氟化物、磷酸二苯酯）。 2.糖基化为苷元...使用NIS和TMSOTf作为启动子，使用七种类型的苷元和lycotetraosy1硫代糖苷，在-40℃下进行糖基化反应。结果，以16-52%的产率获得作为非天然α-缀合物的具有相应糖苷配基部分的糖苷。 3. 提高β选择性和收率条件的研究…我们研究了硫代糖苷和替高配基的反应温度，发现当温度升高到40°C时，β糖苷的产率达到29%（α/β = 1/5）。此外，以氟化物为糖供体，以CP_2HfCl_2和AgClO_4为启动子，在-40℃下与胆固醇进行糖基化，以78%的高收率得到α-糖苷。当磷酸二苯酯作为糖供体、胆固醇与TMSOTf作为启动子在-40℃下反应时，合成了β-糖苷，收率为41%（α/β=2/1）。由上可知，使用氟化物时，容易得到高收率的α-糖苷，而使用磷酸二苯酯在-40℃或硫代糖苷在40℃下可以得到β-糖苷。 4.获得的lycotetraosy1衍生物的癌细胞抑制试验...使用各种癌细胞(A549、HepG2、LLC-PK1)进行细胞生长抑制试验，并研究结构-活性关系。在相同苷元的情况下，发现具有β-连接糖苷键的糖苷比α-连接糖苷具有更强的活性。还推断糖苷配基部分对具有胆甾烷骨架的糖苷比对C27类固醇骨架具有更强的活性。