転位活性を持つビフィズス菌挿入配列の単離と変異導入系の構築

具有转座活性的双歧杆菌插入序列的分离和诱变系统的构建

• 批准号: 18780050
• 负责人: 吹谷 智
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780050/
• 关键词: ビフィズス菌; 挿入配列; 転位; 変異導入

平成19年度はビフィズス菌からの挿入配列の単離および単離された挿入配列の詳細な解析を行った.1.新規挿入配列様因子TLS16の解析昨年度同定されたBifidobacterium longum BK28株由来の挿入配列様因子TLS16について塩基配列の解析および各種ビフィズス菌における保存性について解析を行った.TLS16は1.59kbpの挿入配列であり,その内部には転位に関与するタンパク質であるトランスポゼースをコードする単一の遺伝子が存在していた.アミノ酸レベルの相同性解析,および因子末端に存在する特徴的なステム・ループ構造などの特徴から,TLS16は挿入配列IS605ファミリーに属する因子と考えられた.またサザンハイブリダイゼーション解析により,TLS16はB.longum,B. breve,B.adolescentis,B.gallicumの基準株にそのホモログが保存されている事を明らかにした.2.転位活性を持つ挿入配列様因子TLS143の解析咋年度構築した転位因子のスクリーニング系を用いて,B.longum 105-A株を用いて転位活性を持つ因子を探索した.その結果,1.43kbpの長さの因子がスクリーニングベクターに挿入されていたため,本因子をTLS143と命名した.TLS143は末端に逆方向反復配列を持つ典型的なIS因子であり,その相同性からからIS3ファミリーに属する因子であると考えられた.1.と同様に各種ビフィズス菌における保存性を調べたところ,TLS16に比べて多くのビフィズス菌種壕存在する普遍性の高い因子であることが明らかになった.ビフィズス菌の転位因子の研究はほとんど行われていなかったが,本研究により二つの因子が同定された.特に,TLS143は転位活性を持つことが証明されたビフィズス菌由来の初めての因子であり,今後更なる応用が期待される.

在2007年，我们从双歧杆菌分离了插入序列，并对分离的插入序列进行了详细分析。1。分析了新的插入序列样因子TLS16的分析，分析了去年鉴定出的双歧杆菌BK28菌株的插入序列样因子TLS16，并分析了各种双歧杆菌的保护特性。 TLS16是1.59 kbp的插入序列，并且有一个编码转座酶的基因，这是一种参与转运的蛋白质。根据因子结束时氨基酸水平同源性分析和特征茎环结构的特征，TLS16被认为是属于插入序列IS605家族的因素。此外，通过南部杂交分析，发现TLS16是属于IS605插入序列家族的因素。据表明，同源物是在Breve，B。adolescentis和B. gallicum的参考菌株中保守的。 2。分析具有转运活性的插入序列样因子TLS143。使用筛选系统来实现一年中构建的易位因子，我们表明使用了牛b。我们使用105-A菌株搜索了具有易位活动的因素。结果，将1.43 kbp的因子插入筛选载体中，该因子称为TLS143。 TLS143是典型的因素，其结尾处具有倒重复序列，其同源性被认为是属于IS3家族的因素。与1相似，当我们研究各种双歧杆菌的保护特性时，发现与TLS16相比，许多双歧杆菌种类沟渠是一个高度普遍的因素。尽管对双歧杆菌易位因子的研究很少，但通过本研究确定了两个因素。特别是，TLS143是证明具有易位活动的双歧杆菌的第一个因素，并且将来会有进一步的应用。

项目成果

Bifidobacterium longum内在性プラスミドからの挿入配列の同定と塩基配列解析

长双歧杆菌内源质粒插入序列的鉴定和核苷酸序列分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 吹谷 智;杉山智彦;加納康正;横田篤
• 通讯作者: 横田篤

ランダム変異導入系構築に向けたビフィズス菌からのトランスポゾン様因子の同定と解析

双歧杆菌转座子样因子的鉴定与分析及其构建随机突变导入系统

• 发表时间: 2007
• 作者: 吹谷 智;杉山智彦;加納康正;横田篤
• 通讯作者: 横田篤

Identification and characterization of a transposon-like sequence in a cryptic plasmid from Bifidobacterium longum

长双歧杆菌隐秘质粒中转座子样序列的鉴定和表征

• 发表时间: 2007
• 作者: Satoru Fukiya;Tomohiko Sugiyama;Yasunobu Kano and Atsushi Yokota
• 通讯作者: Yasunobu Kano and Atsushi Yokota

ビフィズス菌Bifidobacterium longum内在性プラスミドからの挿入配列の同定と塩基配列解析

长双歧杆菌内源质粒插入序列的鉴定和核苷酸序列分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 吹谷 智;杉山智彦;加納康正;横田篤
• 通讯作者: 横田篤

ビフィズス菌からの転位能をもつ挿入配列の単離と同定

双歧杆菌转座插入序列的分离和鉴定

• 发表时间: 2008
• 作者: 小林諒子;吹谷 智;加納康正;横田篤
• 通讯作者: 横田篤