ホヤ胚誘導における応答能および非対称細胞分裂の制制メカニズム

海鞘胚胎诱导过程中细胞不对称分裂的响应及控制机制

基本信息

批准号：
18770200
负责人：
熊野岳
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770200/
关键词：
初期胚発生ホヤ誘導応答能非対称細胞分裂

项目摘要

<誘導における応答能の制御>間充織誘導において、誘導シグナルであるFGFと内在性応答能因子であるMacho-1がどのように相互作用して組織特異性を生み出すのかという問題に対して、FGFシグナルにより活性化される転写因子EtsとMacho-1が、間充織特異的遺伝子の転写調節領域上にそれぞれ結合し転写を制御するこどで、両者の情報が統合される、というノ仮説を立てている。そこで本年度は、間充織特異的遺伝子であるtwist-like転写因子遺伝子の転写調節領域をマボヤゲノムよりInverse PCR法を用いて単離し、この領域約1.1 kbを含むプロモーターコンストラクトを作成した。このコンスシトラクトを胚に導入して、レポーター遺伝子であるLacZの発現をin situ hybridization法により検出したところ、尾芽胚において非常に強いジグナルが間充織細胞でのみ確認された。ところが、間充織誘導が起こって間もなくの110細胞期胚における発現をみたところ、予定間充織細胞での発現が確認できなかった。内在のtwist-like遺伝子の発現についても、現在までに種々の方法を試してみたにもかかわらず、110細胞期での予定間充織細胞での発現を確認できていない事実と合わせると、今回用いたtwist-like遺伝子は、FGFシグナルに応答して直接的に発現してくる遺伝子ではなく、本研究の目的には適さないものであることが明らかになった。胚の前方に脊索、後方に間充織を作り出すような胚全体の空間的地図が、どのように描かれていくのかを理解するために、本年度は、受精後の細胞質再配置により胚後方に局在する母性因子PEMめ関与を検証した。その結果、PEMは胚後方において、脊索誘導における応答能制御因子であるFoxA/ZicNの転写を抑制することにより、・FGFシグナルに対する前方特異的な応答能を抑制しているととを明らかにした。

<诱导中反应性的控制> 在间充质诱导中，我们解决了诱导信号 FGF 和内源性反应因子 Macho-1 如何相互作用以产生组织特异性的问题。假设转录因子 Ets 和 Macho-1 是如何相互作用的。 1 被 FGF 信号激活，与间充质特异性基因的转录调控区域结合并控制转录，从而整合来自两者的信息。因此，今年，我们利用反向PCR方法从Maboya基因组中分离出了间充质特异性基因twist-like转录因子基因的转录调控区，并创建了包含该区域约1.1 kb的启动子构建体。当将该合体引入胚胎并通过原位杂交检测报告基因LacZ的表达时，仅在尾芽胚胎中的间充质细胞中证实了非常强的信号。然而，当我们在间充质诱导后不久观察110细胞阶段胚胎中的表达时，我们无法确认它在假定的间充质细胞中表达。关于内源性扭曲样基因的表达，尽管迄今为止尝试了各种方法，但我们仍无法确认其在110细胞阶段的间充质细胞中的表达，很明显所使用的扭曲样基因不是内源性扭曲样基因。该基因直接响应 FGF 信号而表达，不适合本研究的目的。为了了解整个胚胎的空间图是如何绘制的，脊索在胚胎的前面，间质在后面，今年我们将重点对局部母体因素PEM的参与进行验证。结果，我们发现 PEM 通过抑制 FoxA/ZicN（胚胎后部区域脊索引导的调节因子）的转录来抑制前部对 FGF 信号的反应能力。