タマネギバエの耐寒性機構の解明-chaeroninの関与を中心に-

阐明洋葱蝇的耐冷机制 - 以毛囊素的参与为中心 -

基本信息

批准号：
06J10873
负责人：
粥川琢巳
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J10873/
关键词：
耐寒性 CCT タマネギバエアクチン depolymerization Latrunculin B 転写制御 RNAi COT トリパンブルー real-time PCR

项目摘要

タマネギバエ(Delia antiqua)を用いてCCT(chaperonin containing the TCP-1)が耐寒性獲得に関与していることを明らかにするため以下の実験を行った.1.CCTを構成する全サブユニット(α〜θ)が,耐寒性の増加に伴い全サブユニットのmRNA発現量が同調して増加していた.2.低温処理後,CCTの基質であるアクチンの構造を蛍光観察したところ,耐寒性の低い個体ではアクチンのdepolymerizationが観察された.また、低温により生じたアクチンのdepolymerizationの後に細胞膜が損傷を受けることが観察された.3.幼虫期にアクチンの重合阻害剤であるLatruncuhnB(LatB)を摂食させた蛹を用いて耐寒性試験を行った.その結果LatBを摂食した蛹において有意に耐寒性の低下が観察された.4.耐寒性を獲得するとCCTを構成する全サブユニットが同調して増加することから、全サブユニットが同じ転写制御を受けていることが示唆された。そこで、genome workingにより全サブユニットの上流のシーケンスを明らかにした。しかし、全てのgenome workingが完了せず、エンハンサーやプロモーターの解析には至らなかった。5.RNAiによりCCTを構成するサブユニットのサイレンシングを試みた。しかし、適切な条件を見出すことができず、結果を得ることができなかった。以上の結果から,CCTの転写制御ならびにRNAiにおける証明には至らなかったが、耐寒性の高い蛹ではCCTが細胞内に多く存在するためアクチンの増強,もしくは低温によってdepolymerizationが生じても迅速にアクチンの再重合を誘発し,その結果アクチンが細胞膜を保護することで耐寒性を獲得していることが示唆された。

CCT（伴侣蛋白含有为了阐明TCP-1)参与耐冷性的获得，我们进行了以下实验1.构成CCT的所有亚基(α~θ)的mRNA表达量同步增加。 2.低温处理后，对CCT底物肌动蛋白的结构进行荧光观察，发现在耐冷能力低的个体中观察到肌动蛋白解聚。观察到细胞膜在聚合后被破坏。 3.使用在幼虫阶段喂食肌动蛋白聚合抑制剂LatruncuhnB (LatB)的蛹进行耐冷性测试。在喂食 tB 4 的蛹中观察到耐冷性显着下降。当获得耐冷性时，构成 CCT 的所有亚基都同步增加，这表明所有亚基都受到相同的转录控制。因此，我们通过基因组工作阐明了所有亚基的上游序列。然而，所有基因组工作尚未完成，增强子和启动子的分析也是不可能的。 5.我们尝试通过RNAi沉默构成CCT的亚基。然而，他们无法找到合适的条件，也无法获得结果。虽然上述结果并不能证明CCT参与转录调控和RNAi，但在耐冷性较高的蛹中，CCT在细胞内大量存在，因此即使由于肌动蛋白增强或发生解聚，肌动蛋白也会迅速激活。结果表明肌动蛋白通过保护细胞膜获得耐寒性。