タマネギバエの耐寒性機構の解明-chaeroninの関与を中心に-

阐明洋葱蝇的耐冷机制 - 以毛囊素的参与为中心 -

基本信息

批准号：
06J10873
负责人：
粥川琢巳
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J10873/
关键词：
耐寒性 CCT タマネギバエアクチン depolymerization Latrunculin B 転写制御 RNAi COT トリパンブルー real-time PCR

项目摘要

タマネギバエ(Delia antiqua)を用いてCCT(chaperonin containing the TCP-1)が耐寒性獲得に関与していることを明らかにするため以下の実験を行った.1.CCTを構成する全サブユニット(α〜θ)が,耐寒性の増加に伴い全サブユニットのmRNA発現量が同調して増加していた.2.低温処理後,CCTの基質であるアクチンの構造を蛍光観察したところ,耐寒性の低い個体ではアクチンのdepolymerizationが観察された.また、低温により生じたアクチンのdepolymerizationの後に細胞膜が損傷を受けることが観察された.3.幼虫期にアクチンの重合阻害剤であるLatruncuhnB(LatB)を摂食させた蛹を用いて耐寒性試験を行った.その結果LatBを摂食した蛹において有意に耐寒性の低下が観察された.4.耐寒性を獲得するとCCTを構成する全サブユニットが同調して増加することから、全サブユニットが同じ転写制御を受けていることが示唆された。そこで、genome workingにより全サブユニットの上流のシーケンスを明らかにした。しかし、全てのgenome workingが完了せず、エンハンサーやプロモーターの解析には至らなかった。5.RNAiによりCCTを構成するサブユニットのサイレンシングを試みた。しかし、適切な条件を見出すことができず、結果を得ることができなかった。以上の結果から,CCTの転写制御ならびにRNAiにおける証明には至らなかったが、耐寒性の高い蛹ではCCTが細胞内に多く存在するためアクチンの増強,もしくは低温によってdepolymerizationが生じても迅速にアクチンの再重合を誘発し,その結果アクチンが細胞膜を保護することで耐寒性を獲得していることが示唆された。

CCT（含有洋葱蝇（Delia angiqua）以澄清TCP-1）的CCT参与获得冷耐受性，进行了以下实验。1。构成CCT的所有亚基（α-θ）随着冷耐受性的增加而增加。2。低温处理后，在低耐受性的个体中观察到肌动蛋白的结构，即CCT的底物。此外，在低温引起的肌动蛋白中观察到肌动蛋白的解聚。据观察，细胞膜在淋巴结后受损3。在幼虫阶段，使用用Latruncuhnb（LATB）（Latruncuhnb（LATB））进行冷耐受性测试。结果，在用LATB.4的pupaes中观察到冷耐受性的显着降低。当实现冷耐受性时，所有构成CCT的亚基同步增加了，这表明所有亚基都受到相同的转录对照。因此，基因组工作揭示了所有亚基的上游序列。但是，所有基因组工作均未完成，并且没有实现增强子或启动子分析。 5。试图使用RNAi构成CCT的亚基沉默。但是，找不到适当的条件，也没有获得结果。以上结果表明，CCT和RNAi的转录控制未得到证实，但是在细胞中具有高度冷的CCT，即使在肌动蛋白增强或下聚合是由于低温引起的，肌动蛋白重聚也会迅速诱导肌动蛋白重新聚合，从而导致细胞型和成就型肌动蛋白。