概日リズム朝夕2つの活動ピークを形成する時計タンパク質PERIOD変異体

昼夜节律一种时钟蛋白 PERIOD 突变体，在早上和晚上形成两个活动高峰

基本信息

批准号：
06J09514
负责人：
武田行正
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ショウジョウバエは、一日のうちで朝方と夕方の2回、活動ピーク時期をもつ。ショウジョウバエ脳において、概日時計を司るニューロン群のうち、腹側小ニューロンs-LNvと背側ニューロンLNdが、この朝方と夕方の行動リズムをそれぞれ独立に制御していることが報告されている。これら2種類のニューロン群に時計遺伝子periodのアイソフォームがそれぞれ個別に発現しているかどうか、またこれらアイソフォーム間の発現リズムに相違はあるのかについて研究を行った。まず、ショウジョウバエPERIODのC端アイソフォームの発現リズム調べるため、そのmRNAおよびタンパク質の発現リズムを、定量的リアルタイムPCRおよびウエスタンブロッティングの手法を用いて詳細に解析した。その結果、これまで知られていたPERIODの発現リズムとは明確に異なる発現リズムが検出された。このことは朝夕の活動ピークをPERIODが作り分ける証拠を示す上で極めて重要な発見である。また、このC端の選択的スプライシングが光感受性の選択的スプライシングであり、すでに報告されていた温度感受性のスプライシングの存在と全く対照的な制御機構であることが提案された。次に、このような朝方と夕方に発現ピークを示すアイソフォームが、異なる時計ニューロンにそれぞれ発現しているかを同定するため、in situハイブリダイゼーションおよび免疫染色を行った。細胞融合法により、10種類もの新規モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの作製に成功した。この内ウエスタンブロッティングに使用可能なものは数種類あったが、現在までのところ、これらの抗体を用いた免疫染色において、PERIODアイソフォームの特異的な染色には至っていない。量的に少ないPERIODのアイソフォームを組織学的に同定するためには、さらに高品質な抗体や詳細な条件検討が必要であると考えられた。

Shoujo Bais在白天的早晨和晚上有两个高峰。据报道，在Shoujo Bae的大脑中，在控制日常时钟的神经元中，小神经元S-LNV和后神经元LND控制着今天早晨和晚上的行为节奏。我们研究了这两种类型的神经元在每个时钟基因周期中是否有不同，以及同工型之间的表达节奏是否存在差异。首先，为了检查shoujo bae时期的C端同工型的表达节奏，使用定量的真实时间PCR和Western blotting方法对mRNA和蛋白表达节奏进行了详细分析。结果，从该时期的表达节奏中检测到明显不同的表达节奏，这是已知的。这是一个极为重要的发现，表明证据表明周期将分开早晨和晚上的活动达到顶峰。此外，有人提出，C端末端的选择性剪接是光灵敏度的选择性剪接，并且是一种完全对比的控制机制，现有的温度灵敏度已经报道了。接下来，进行原位杂交和免疫补给，以确定早晨和晚上这种表达峰的峰是否在不同的时钟神经元中表达。细胞融合方法成功地产生了杂交瘤，该杂交瘤产生了10种新的单链抗体。其中，有几种可以用于蛋白质印迹的类型，但是迄今为止，使用这些抗体的免疫剂并不是时期同工型的特定染色。为了确定定量的同工型，人们认为考虑了更高质量的抗体和详细条件。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

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专利数量（0）

Novel identification of multiple mRNA isoforms of mammalian circadian clock gene period lacking the C-terminal CRY-binding domain

缺乏C端CRY结合域的哺乳动物生物钟基因周期的多种mRNA亚型的新鉴定

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Matsushima;et. al.;Takeda et al.;Koga et al.;Sumiyoshi et al.;Takeda et al.;Sumida et al.;武田行正
通讯作者：
武田行正

カイコガPERIODアイソフォームによる概日リズム二峰性の分子機構解明

蚕 PERIOD 亚型阐明双峰昼夜节律的分子机制

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Matsushima;et. al.;Takeda et al.;Koga et al.;Sumiyoshi et al.;Takeda et al.;Sumida et al.;武田行正;武田行正;武田行正;武田行正;武田行正;住吉美穂;武田行正;武田行正;武田行正;武田行正;川中智佐都;武田行正
通讯作者：
武田行正

イエバエ概日リズムペースメーカーホルモンPDFアイソフォームのcDNAクローニング

家蝇昼夜节律起搏激素 PDF 同种型的 cDNA 克隆

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
川中智佐都;武田行正;松島綾美;下東美樹;下東康幸
通讯作者：
下東康幸

Immunocytochemical Localization of the Circadian Neuropeptides PAP and PDF in the house fly Musca domestica Brain

家蝇脑中昼夜节律神经肽 PAP 和 PDF 的免疫细胞化学定位

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Comparative Biochemistry and Physiology 2006
影响因子：
0
作者：
Matsushima;et. al.;Takeda et al.;Koga et al.;Sumiyoshi et al.;Takeda et al.;Sumida et al.
通讯作者：
Sumida et al.

ビスフェノールAの低用量効果が疑われるヒト生殖組織および脳におけるエストロゲン関連受容体ERRγの発現解析

疑似低剂量双酚A作用的人体生殖组织和大脑中雌激素相关受体ERRγ的表达分析