ゼブラフィッシュGal4エンハンサートラップ法の開発とその器官形成研究への応用

斑马鱼Gal4增强子捕获方法的建立及其在器官发生研究中的应用

基本信息

批准号：
06J01615
负责人：
浅川和秀
金额：
$ 2.18万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)Gal4トラップ法を用いて単離したhspGFF62A系統は、破傷風神経毒素を発現させると振動刺激に対する逃避行動に特に顕著な欠損を示すことを見いだした。およそ50%のhspGFF62A;UAS:TeTxLC二重トランスジェニック幼魚は、振動刺激に対する逃避行動に特徴的な速いターンとそれに伴う速いスイミングを示さなかった。(2)hspGFF62A系統のGal4発現細胞を、UAS:GFPレポーター系統と掛け合わせることで可視化した。hspGFF62A;UAS:GFP二重トランスジェニック幼魚においては、振動刺激を感知する側線感覚器官と、逃避行動に関与するマウスナー細胞がGFPによって染色された。側線とマウスナー細胞はシナプスを形成することが知られているが、これらの結果は、側線とマウスナー細胞を介した経路が振動刺激に対する速いターンとそれに伴う速いスイミングに重要な役割を果たしていることを示唆している。(3)後脳の介在神経を含む領域にGal4を発現するhspGGFF27A系統をGal4エンハンサートラップスクリーニングによって単離した。hspGGFF27A系統とUAS:TeTxLC系統を交配させ、後脳の介在神経を含む領域に破傷風神経毒素を発現させると、受精後48時間以降の胚、幼魚の運動は完全に抑えられた。(4)後脳による運動の制御の開始についてより詳細に解析するために、後脳にGal4を発現し、なおかつ脊髄ニューロンで全くGal4を発現しない系統g104Aとg266Aを単離した。(5)g104A系統とUAS:TeTxLC系統を交配させ、後脳に特異的に破傷風神経毒素を発現させると、受精後48時間の胚の逃避行動に異常を確認した。この結果は、受精後48時間において脳を介した逃避行動の制御が行なわれていることを示している。

（1）我们发现使用GAL4陷阱方法分离的HspGFF62A线在表达破伤风神经毒素时表现出对振动刺激的逃生行为特别重要的缺陷。 HSPGFF62A的大约50％; UAS：TETXLC双转基因少年没有快速转弯，并且相关的快速游泳特征是逃逸行为与振动刺激的特征。（2）通过与UAS：GFP报道器线乘以HSPGFF62A系的GAL4表达细胞。 HSPGFF62A; UAS：GFP双转基因少年鱼，侧面感觉器官，感知振动刺激和参与逃脱行为的鼠类细胞的侧向器官被GFP染色。尽管已知侧向线和鼠标细胞形成突触，但这些结果表明，侧线和鼠类细胞介导的途径在快速转向振动刺激和相关的快速游泳中起着重要作用。（3）通过GAL4增强子陷阱筛选分离出包含后脑神经的区域中表达GAL4的HSPGGFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFFINE。当Hspggfff27a线与UAS配对时：TETXLC系，而破伤风神经毒素在包含后脑的中间神经元的区域表达，肥料后48小时后胚胎和幼鱼的运动完全抑制。（4）为了进一步分析后脑的运动控制启动，我们分离了在后脑中表达GAL4的G104A和G266A线，在脊柱神经元中根本没有表达Gal4。（5）当G104A线与UAS：TETXLC线配对时，破伤风神经毒素在后脑脑中特异性表达时，胚胎逃脱行为的异常在受精后48小时确认。这些结果表明，在受精后48小时内，对脑介导的逃生行为的控制进行。