子宮内膜症、子宮内膜癌の発症・進展におけるTLR-MyD88経路についての研究

TLR-MyD88通路在子宫内膜异位症及子宫内膜癌发病进展中的研究

• 批准号: 18890060
• 负责人: 平田 哲也
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890060/
• 关键词: Th17; Il-17; endometriosis; TLR; 子宮内膜; 自然免疫; 月経周期

子宮内膜症とTLRの検討をしているうちに、IL-17が子宮内膜症において特徴的な局在を示すことが解った。今回、私達は子宮内膜症患者の腹腔内貯留液(PF)中の単核球(PFMC)におけるTh17の存在を明らかとし、IL-17の子宮内膜症細胞(ESC)に対する効果につき検討した。【方法】子宮内膜症患者より同意を得た上で、PFと切除した子宮内膜症性卵巣のう胞組織の一部を用いた。また、子宮内膜症組織よりESCを分離培養し、以下の検討に用いた。(1)flow cytometry法にてPFMC中のTh17の存在を調べた。(2)免疫染色法にて、子宮内膜症組織におけるTh17の局在を調べた。(3)分離培養したESCにおけるIL-17受容体(IL-17R)の発現を免疫染色法で調べた。(4)ESCをIL-17で24時間刺激し、IL-8の産生をELISA法にて調べた。さらに、IL-17Rの中和抗体を添加した上で上清中のIL-8産生をELISA法にて調べた。(5)Western Blot法にてp38,ERK,JNKのリン酸化を調べた。(6)また、それぞれのinhibitorによる上清中へのIL-8産生に対する効果をELISA法にて調べた。(7)TNF・とIL-17を同時添加し、上清中のIL-8産生をELISA法にて調べた。(8)ESCをIL-17で48時間刺激し、BrdUの取り込みを調べた。【結果】(1)EM患者PF中にTh17が存在した。(2)IL-17陽性細胞は、正常子宮内膜に比較し、子宮内膜症病変に著明に多く存在し、腺上皮の直下に多く局在していた。また正常卵巣表面にはIL-17陽性細胞は存在しなかった。(3)ESCはIL-17Rを発現していた。(4)ESCは1ng/ml以上のIL-17刺激により有意にIL-8の産生を亢進した。また、IL-17Rの中和抗体は、このIL-8産生をほぼ完全に抑制した。(5)p38,ERK,JNKのリン酸化はそれぞれ5分、または15分にピークが見られた。(6)また、それぞれの経路のinhibitorによりIL-17刺激によるESCのIL-8産生は抑制された。(7)TNF・とIL-17の同時添加により、相乗的なIL-8産生の増加がみられた。(8)IL-17刺激は、1ng/ml以上でESCのBrdUの取り込みを有意に増加させた。【結論】子宮内膜症患者の腹水中及び子宮内膜症病変にTh17が存在することを明らかにした。IL-17はESCにおいて、子宮内膜症進展の重要因子であるIL-8産生を促進し、増殖を促すことを示した。また、IL-17は、TNF・と共同して炎症反応を相乗的に亢進

在研究子宫内膜异位症和 TLR 时，发现 IL-17 在子宫内膜异位症中表现出特征性定位。在这里，我们揭示了子宫内膜异位症患者腹腔液（PF）中的单核细胞（PFMC）中存在Th17，并研究了IL-17对子宫内膜异位症细胞（ESC）的影响。 [方法]经子宫内膜异位症患者同意后，使用PF和部分切除的子宫内膜异位症卵巢囊肿组织。此外，从子宫内膜异位组织中分离培养ESCs并用于后续研究。 (1)使用流式细胞术研究PFMC中Th17的存在。 (2)利用免疫染色研究Th17在子宫内膜异位症组织中的定位。 (3)通过免疫染色研究分离培养的ESC中IL-17受体(IL-17R)的表达。 (4)用IL-17刺激ESCs 24小时，并通过ELISA检测IL-8的产生。此外，添加IL-17R中和抗体，并通过ELISA检查上清液中IL-8的产生。 (5)采用Western Blot法检测p38、ERK、JNK的磷酸化。 (6)此外，使用ELISA研究了每种抑制剂对上清液中IL-8产生的影响。 (7)同时加入TNF·和IL-17，通过ELISA检测上清液中IL-8的产生。 (8)用IL-17刺激ESC 48小时并检查BrdU掺入。 [结果](1) EM患者PF中存在Th17。 (2)IL-17阳性细胞在子宫内膜异位病变中明显比正常子宫内膜丰富，并且直接位于腺上皮下方。此外，正常卵巢表面不存在IL-17阳性细胞。 (3)ESC表达IL-17R。 (4)当用1ng/ml或更多的IL-17刺激时，ESC显着增强IL-8的产生。此外，IL-17R 中和抗体几乎完全抑制了 IL-8 的产生。 (5) p38、ERK 和 JNK 的磷酸化分别在 5 分钟和 15 分钟时达到峰值。 (6) 此外，各途径的抑制剂抑制 IL-17 刺激的 ESC 产生 IL-8。 (7)同时添加TNF·和IL-17导致IL-8产量的协同增加。 (8) IL-17 刺激显着增加 ESC 中 BrdU 的摄取，水平高于 1 ng/ml。 [结论]我们发现子宫内膜异位症患者的腹水和子宫内膜异位病灶中存在Th17。 IL-17 被证明可以促进 IL-8 的产生，这是子宫内膜异位症进展的重要因素，并促进 ESC 的增殖。此外，IL-17 与 TNF 协同增强炎症反应。