歯肉線維芽細胞上に発現するHLAクラスII分子の生理的意義の解明

阐明牙龈成纤维细胞表达的 HLA II 类分子的生理意义

基本信息

批准号：
18791594
负责人：
畑中加珠
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791594/
关键词：
シグナル伝達歯肉線維芽細胞 HLAクラスII分子

项目摘要

昨年度,歯肉線維芽細胞(GF)におけるHLAクラスII分子(HLA-II)を介した細胞内シグナル伝達物質として,focal adhesion kinase(FAK)の活性化を確認した。そこで本年度は,1)FAKとHLA-IIとの会合形態,2)サイトカイン産生に至るシグナル伝達へのFAKの影響を検討した。健常人の辺縁歯肉から分離・培養したGFを用い,ヒトIFN-γによって細胞膜上にHLA-IIを発現誘導させた。1)抗HLA-II抗体(L243)が認識するHLA-IIと会合分子複合体を免疫沈降することによって会合分子を得た。IFN-γ処理と未処理のGFから免疫沈降法によって得た画分をSDS-PAGEで分離した後にWestern blotting法でFAKを検出した。同様に,L243にて免疫沈降した画分からFAKおよびリン酸化FAKを検出した。その結果,FAKは共沈降する分子として検出され,またL243でGFを刺激した際に細胞内FAKのリン酸化が増強した。2)L243刺激したGFにおけるFAKのリン酸化がFAK阻害剤(luteolin,quercetin)によって影響を受けるかどうかを,Western blotting法で調べた。luteolinはFAKのリン酸化を抑制したが,quercetinは影響を与えなかった。さらに,培養上清中のサイトカインの量をELISA法で測定すると,luteolinは,L243刺激によって誘導されるGFからのIL-6,MCP-およびRANTESの産生を濃度依存的に抑制した。一般にFAKは,インテグリン(接着分子)の細胞内,ドメインと会合しインテグリンを介してシグナル伝達することが知られている。本研究では,FAKがHLA-IIと直接会合してHLA-IIを介したサイトカイン産生に至るシグナル伝達に関与することが新たに示唆された。

去年，我们证实黏着斑激酶 (FAK) 作为细胞内信号转导器通过牙龈成纤维细胞 (GF) 中的 HLA II 类分子 (HLA-II) 被激活。因此，今年，我们研究了1）FAK和HLA-II之间的关联形式，以及2）FAK对导致细胞因子产生的信号转导的影响。使用从健康个体的边缘牙龈分离和培养的GF，通过人IFN-γ在细胞膜上诱导HLA-II表达。 1)通过免疫沉淀HLA-II和抗HLA-II抗体(L243)识别的相关分子的复合物获得相关分子。通过免疫沉淀从IFN-γ处理和未处理的GF获得的级分通过SDS-PAGE分离，然后通过Western blotting检测FAK。类似地，在用L243免疫沉淀的级分中检测到FAK和磷酸化FAK。结果，检测到FAK作为共沉淀分子，并且当用L243刺激GF时细胞内FAK的磷酸化增强。 2)采用Western blotting检测L243刺激的GF中FAK磷酸化是否受到FAK抑制剂（木犀草素、槲皮素）的影响。木犀草素抑制 FAK 磷酸化，但槲皮素没有作用。此外，当通过ELISA测量培养物上清液中细胞因子的量时，木犀草素以浓度依赖性方式抑制由L243刺激诱导的GF产生IL-6、MCP-和RANTES。众所周知，FAK与整合素（粘附分子）的细胞内结构域结合，并通过整合素传递信号。这项研究最新表明，FAK 直接与 HLA-II 相关，并参与导致 HLA-II 介导的细胞因子产生的信号转导。