口腔がんにおけるリンパ管新生因子VEGF-C遺伝子発現調節機構の解明

口腔癌淋巴管生成因子VEGF-C基因表达调控机制的阐明

• 批准号: 18791483
• 负责人: 道 泰之
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791483/
• 关键词: VEGF-C; 口腔癌; リンパ管新生; 転写因子; 発現調節; 口腔がん; 転写因子制御; 臨床腫瘍学; VEGF-C; 口腔癌; リンパ管新生; 転写因子; 発現調節; 口腔がん; 転写因子制御; 臨床腫瘍学

本年度はその目的と実施計画に従い、研究を逐行した。1.リンパ管内皮細胞の培養は安定して行い得た。市販培養細胞ではなく、ヒト皮膚微小血管内費細胞からの分離培養が安定して行い得た。2.リンパ管内皮細胞3次元培養による腫瘍リンパ管新生能の検定。リンパ管新生能を検定するためこの方法を選択したが、結果が不安定なため、リンパ管内皮細胞の増殖能を直接検定する方法に変更した。3.発現調節領域の構造と機能の解析(1)プロモーター解析を完了した。前年度より継続してルシフェラーゼアッセイにより発現を確認し、遺伝子導入細胞株により活性の差を確認した。(2)エンハンサー領域の同定を行った。最小領域の同定のためプロモーター単独での解析を行い、繰り返し配列も作成し、遺伝子導入の後活性の差をルシフェラーゼアッセイにて検定した。4.転写制御は既知の遺伝子によるものであり、解析は不要であった。5.リンパ管内皮細胞と口腔がん細胞株の共培養により、細胞株の違いによる増殖活性の違いを確認した。また、その活性の違いとマウス移植での転移能を検討し、その相関が判明した。6.VEGF-Cの過剰発現を生じる細胞株作成を行った。その結果得られた細胞株をマウスに移植するよう試みたが、過剰発現細胞株は-過性発現のものにおいては再現性のある結果が得られず、向上発現を行う細胞株の作成には至らなかった。以上の解析を行い、成果を次年度以降刊行される雑誌に投稿する。

今年，该研究是根据其目标和实施计划进行的。 1。淋巴内皮细胞稳定培养。从人体皮肤微血管成本细胞而不是市售培养的细胞中可以分离和培养。 2。使用3D淋巴内皮细胞测试肿瘤淋巴管势。选择了该方法来测试淋巴管生成潜力，但是由于结果不稳定，该方法被更改为一种直接测试淋巴管内皮细胞增殖潜力的方法。 3。对表达调节区域的结构和功能的分析（1）启动子分析已完成。通过上一年的荧光素酶测定法证实了表达，活性差异通过转基因细胞系证实。 （2）确定增强子区域。为了鉴定最小的区域，单独分析了启动子，还制备了重复序列，并使用荧光素酶测定法测定了基因转移后的活性差异。 4。转录控制是由已知基因引起的，并且不需要分析。 5。通过淋巴内皮细胞和口腔癌细胞系的共培养证实，由于细胞系差异而导致的增殖活性差异。此外，研究了小鼠移植中活性和转移潜能的差异，并发现了相关性。 6。创建了产生VEGF-C的过表达的细胞系。尽管尝试将所得细胞系植入小鼠中，但过表达的细胞系在过表达的细胞系中不可重现，并且无法实现具有改善表达的细胞系的产生。上述分析将进行，结果将从明年开始发表的杂志提交。