口腔がんにおけるリンパ管新生因子VEGF-C遺伝子発現調節機構の解明

口腔癌淋巴管生成因子VEGF-C基因表达调控机制的阐明

基本信息

批准号：
18791483
负责人：
道泰之
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度はその目的と実施計画に従い、研究を逐行した。1.リンパ管内皮細胞の培養は安定して行い得た。市販培養細胞ではなく、ヒト皮膚微小血管内費細胞からの分離培養が安定して行い得た。2.リンパ管内皮細胞3次元培養による腫瘍リンパ管新生能の検定。リンパ管新生能を検定するためこの方法を選択したが、結果が不安定なため、リンパ管内皮細胞の増殖能を直接検定する方法に変更した。3.発現調節領域の構造と機能の解析(1)プロモーター解析を完了した。前年度より継続してルシフェラーゼアッセイにより発現を確認し、遺伝子導入細胞株により活性の差を確認した。(2)エンハンサー領域の同定を行った。最小領域の同定のためプロモーター単独での解析を行い、繰り返し配列も作成し、遺伝子導入の後活性の差をルシフェラーゼアッセイにて検定した。4.転写制御は既知の遺伝子によるものであり、解析は不要であった。5.リンパ管内皮細胞と口腔がん細胞株の共培養により、細胞株の違いによる増殖活性の違いを確認した。また、その活性の違いとマウス移植での転移能を検討し、その相関が判明した。6.VEGF-Cの過剰発現を生じる細胞株作成を行った。その結果得られた細胞株をマウスに移植するよう試みたが、過剰発現細胞株は-過性発現のものにおいては再現性のある結果が得られず、向上発現を行う細胞株の作成には至らなかった。以上の解析を行い、成果を次年度以降刊行される雑誌に投稿する。

今年，我们按照宗旨和实施方案开展了研究。 1.可稳定培养淋巴内皮细胞。可以稳定地分离和培养人真皮微血管内生细胞，而不是市售的培养细胞。 2.淋巴管内皮细胞三维培养检测肿瘤淋巴管生成能力。选择该方法检测淋巴管生成能力，但结果不稳定，因此改为直接检测淋巴管内皮细胞增殖能力的方法。 3.表达调控区结构与功能分析 (1)完成启动子分析。延续前一年，通过荧光素酶测定证实了表达，并证实了基因转染细胞系之间的活性差异。 (2)增强子区域的鉴定。为了鉴定最小区域，单独分析了启动子，还创建了重复序列，并使用荧光素酶测定测试了基因引入后活性的差异。 4. 转录控制基于已知基因，因此无需进行分析。 5.通过共培养淋巴管内皮细胞和口腔癌细胞系，我们证实了不同细胞系之间增殖活性的差异。我们还研究了它们移植到小鼠体内时活性和转移潜力的差异，并发现了它们之间的相关性。 6. 我们创建了过度表达 VEGF-C 的细胞系。人们尝试将所得细胞系移植到小鼠体内，但过度表达的细胞系没有产生可重复的结果，并且很难创建具有改善表达的细胞系。将进行上述分析，并将结果提交给明年起出版的杂志。