C型肝炎ウイルス発現モデル動物を用いたsiRNAによる感染抑制系の開発

使用表达丙型肝炎病毒的模型动物开发使用 siRNA 的感染抑制系统

• 批准号: 18590721
• 负责人: 大岡 真也
• 金额: $ 2.57万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18590721/
• 关键词: siRNA; 遺伝子導入療法; HCVレプリコン

本研究において申請者らはC型肝炎ウイルス(HCV)感染に対するRNAi治療の有効性・安全性を検証するため、HCV遺伝子導入マウス、およびHCV感染ヒト肝細胞生者マウスへのshort hairpin RNA(shRNA)発現ベクター導入による、肝組織でのウイルス発現・増殖抑制効果を解析し、以下の結果を得た。(1)HCVゲノムの異なるgenotype間での増殖抑制効果の検討:異なるgenotypeのHCV(1b,2a)に対するRNAiの効果を確認するため、genotype 2aレプリコンより新たにキメラレポーター(Feo)発現レプリコンを作成し、その効果をgenotype 1b Feoレプリコンと比較・検証を行った。レプリコン発現細胞に、HCV-shRNAを導入したところ、1b,2a同等の効果をもってHCV発現を抑制することを確認した。(2)HCV遺伝子発現トランスジェニックマウスモデルにおける解析:マウスアルブミンプロモーター下に肝特異的にHCV-5' UTR/β-galの融合遺伝子を発現するHCV5' UTR/β-galマウスを用いて、HCV shRNAおよびコントロールshRNA発現アデノウイルスベクターを眼窩静脈より投与し、肝細胞でのX-gal染色性を比較したところ、HCV-shRNA導入マウスにおいて肝組織X-Gal染色性が低下する所見を得た。Cre/lox-P制御性HCV遺伝子発現マウスにAxCANCreとsiRNA発現アデノウイルスを共感染させマウス肝臓内のHCV構造蛋白発現を定量したところ、HCV-siRNAせ導入することにより肝組織内core蛋白発現が約80%低下した。今後この結果をもとに、RNAiを応用した、新たな抗HCV治療の実用性と問題点を明確にし、その有効性・実用性について検証を進める。

在这项研究中，申请人通过将短发夹RNA（SHRNA）表达向量引入HCV转基因小鼠和生存的HCV感染的HCV人类肝细胞，从而分析了肝组织中病毒表达和增殖抑制的作用，并获得了以下结果。 （1）检查HCV基因组不同基因组之间的生长抑制作用：为了确认RNAi对不同基因型的HCV（1B，2A）的影响，由基因型2A复制子创建了一种新的嵌合记者（FEO）表达复制品，并将其效果与基因型进行了比较，并与基因型1B进行了比较。当将HCV-shRNA引入表达复制子的细胞中时，可以证实HCV表达被1b和2a的等效作用抑制。 （2）在HCV基因表达的转基因小鼠模型中分析：使用HCV5'UTR/β-GAL小鼠在小鼠白蛋白启动子，HCV shRNA和对照shRNA表达腺病毒载体下的HCV-5'UTR/β-GAL融合基因在小鼠白蛋白启动子下进行的HCV-5'UTR/β-GAL融合基因进行了分析。 HCV-shRNA诱导小鼠中的X-GAL染色显示肝组织X-GAL染色降低。当表达CRE/LOX-P调节性HCV基因的小鼠与轴心和表达siRNA的腺病毒共同感染时，并量化了HCV-SIRNA中HCV结构蛋白的表达时，引入了HCV-SIRNA，并降低了大约80％。基于这些结果，我们将使用RNAi阐明新的抗HCV处理的实用性和问题，并研究这些治疗方法的有效性和实用性。