新タイプのジアシルグリセロールキナーゼアイソザイムのクローニングと生理機能の解析

新型二酰甘油激酶同工酶的克隆及生理功能分析

基本信息

批准号：
06772140
负责人：
坂根郁夫
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ジアシルグリセロールキナーゼ(DGK)は、基質のジアシルグリセロール(DG)と反応産物のホスファチジン酸の両者とも種々の生理活性を持つことが報告され、近年は細胞刺激情報伝達系の研究においても注目されている。DGKには少なくとも5種(cDNAクローニングされたもののみ)のアイソザイムが存在することが明らかになっているが、DGKスーパーファミリーを構成するアイソザイム分子の全貌とそれぞれの生理的役割、構造・機能相関など明らかにすべき課題は多い。本年度は、これらのアイソザイム全てに共通して存在するC3(亜鉛フィンガー構造)とC4ドメインの機能の解析を行った。プロテインキナーゼCの亜鉛フィンガーとの関連(類似性)からDGKの本構造もDG及びホスファチジルセリン(PS)の結合部位であると推定されていたが、DGKαを用いた解析の結果、意外にもDGKの亜鉛フィンガーはこれらの結合部位としては機能しないことが明らかになった(投稿準備中)。C4ドメインのみでもPS依存性の触媒活性を示し、DGやPSに対する親和性が野生型の酵素と同程度なので、この領域にDG及びPS結合部位が存在すると考えられた。尚、現在のところDGKの亜鉛フィンガーの機能は不明であり今後の検討課題である。次に、最近我々がクローニングに成功したDGKδの酵素学的性質や活性制御機構については、このcDNAをCOS7細胞やSf9昆虫細胞で発現させても活性が弱く解析が進んでいない。しかし、興味あることにDGKδの亜鉛フィンガーがホルボールエステル結合能を有することが示唆され、現在その詳細を検討中である。

据报道，二酰甘油激酶（DGK）与底物二酰甘油（DG）和反应产物磷脂酸具有多种生理活性，并且最近在细胞刺激信号转导系统的研究中引起了关注。据透露，至少有五种类型的DGK同工酶（仅限于已被cDNA克隆的那些），但组成DGK超家族的同工酶分子的全貌、它们的生理作用和结构/功能关系尚不清楚有很多问题需要澄清。今年，我们分析了所有这些同工酶共有的 C3（锌指结构）和 C4 结构域的功能。根据与蛋白激酶C的锌指的关系（相似性），DGK的该结构也被推测为DG和磷脂酰丝氨酸（PS）的结合位点，但使用DGKα进行分析的结果意外地发现： DGK 据透露，该分子的锌指不能作为这些的结合位点（准备中的提交）。单独的C4结构域表现出PS依赖性催化活性，并且对DG和PS的亲和力与野生型酶相当，表明该区域存在DG和PS结合位点。 DGK 锌指的功能目前未知，是未来研究的主题。接下来，关于我们最近成功克隆的DGKδ的酶性质和活性控制机制，即使该cDNA在COS7细胞或Sf9昆虫细胞中表达，其活性也很弱，并且分析尚未取得进展。然而，有趣的是，有人认为DGKδ的锌指具有佛波酯结合能力，我们目前正在研究细节。