慢性骨髄性白血病の急性転化におけるWT1遺伝子の解析

慢性粒细胞白血病急变期WT1基因分析

基本信息

批准号：
06770858
负责人：
森直樹
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770858/
关键词：
慢性骨髄性白血病 WT1遺伝子

项目摘要

慢性骨髄性白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)は多能性幹細胞の腫瘍化と考えられ、慢性期は症状に乏しいが急性転化をおこすと予後はきわめて不良となる。近年癌抑制遺伝子の異常が多くの腫瘍で報告され、その発症や進展に関与していると考えられている。CMLにおいては、慢性期から急性転化の過程でp53遺伝子の異常が認められ、急性転化への関与が示唆されている。また巨核芽球性の急性転化ではRB蛋白質の異常も報告されている。WT1遺伝子はWilms腫瘍における癌抑制遺伝子として単離され、近年造血系の細胞、特に骨髄系の細胞で発現が認められているが、これまでのところ造血器腫瘍ではWT1遺伝子の変異は明らかとなっていない。本研究はCMLにおけるWT1遺伝子の異常を経時的に検索し、この異常が急性転化への移行の過程にどのように関与しているか、p53遺伝子の変異との関係はどうかを明らかにすることを目的とする。CML 12例(1例でp53遺伝子の変異を認めている)、MDSおよびovert AML 24例の骨髄または末梢血から単核細胞を分離しDNAを抽出した。CMLの一部では慢性期と急性転化と調べた。このDNAを鋳型として、これまでにWilms腫瘍において変異が報告されているWT1遺伝子の4つのzinc finger領域をPCR法を用いて増幅した。PCR-SSCP解析によりWT1遺伝子を解析した結果、CMLでは泳動度の異常は明らかでなかったが、overt AML 1例で泳動度の異常が検出された。この症例のgenomic DNAから泳動度の異常のみられた領域をPCR法を用いて増幅し、塩基配列の解析を行なった結果missense mutationを認めた。CMLではWT1遺伝子の変異はまれと考えられるが、MDSの一部の症例ではWT1遺伝子の異常が、その発症または進展の過程に関与している可能性が示唆された。

慢性粒细胞白血病（CML）被认为是多能干细胞的肿瘤发生，虽然慢性期症状很少，但发生急性危象时预后极差。近年来，许多肿瘤中都报道了抑癌基因的异常，并被认为与肿瘤的发生和进展有关。在CML中，从慢性期到急变期的过程中观察到p53基因异常，并提示其与急变期有关。巨核细胞急变中也有 RB 蛋白异常的报道。 WT1基因在肾母细胞瘤中作为抑癌基因被分离出来，近年来在造血细胞尤其是骨髓细胞中观察到其表达，但迄今为止，在造血肿瘤中尚未发现WT1基因的突变。。本研究旨在寻找 CML 中 WT1 基因随时间的异常情况，并阐明这种异常情况如何参与向急变期的转变过程，以及它是否与 p53 基因的突变有关。从12例CML（1例p53基因突变）和24例MDS及明显AML患者的骨髓或外周血中分离单核细胞，并提取DNA。对一些慢性粒细胞白血病病例进行了慢性期和急变期的调查。使用该 DNA 作为模板，使用 PCR 扩增了 WT1 基因的四个锌指区域（据报道，这些区域在肾母细胞瘤中发生突变）。通过PCR-SSCP分析对WT1基因进行分析，结果显示，在CML中未见明显的电泳异常，但在1例明显的AML中检测到了电泳异常。采用PCR方法从该病例的基因组DNA中扩增出电泳异常的区域，并对碱基序列进行分析，结果发现存在错义突变。尽管 WT1 基因突变被认为在 CML 中很少见，但有人认为 WT1 基因异常可能与某些 MDS 病例的发病或进展有关。