T.Forsythensisのプロテオーム解析による病原性蛋白質の解明

通过 T. Forsythensis 蛋白质组分析阐明致病蛋白

• 批准号: 17791551
• 负责人: 竹内 康雄
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791551/
• 关键词: Tannerella forsythensis; プロテオーム; Tannerella forsythensis; プロテオーム

急速な進行と重度の破壊を特徴とする侵襲性歯周炎患者群と、緩慢な進行を特徴とする慢性歯周炎患者群より採取したT.forsythensisの臨床分離株をAP-PCR法により解析すると、2つのグループでは検出される遺伝子型に違いが認められた。そこで、さらにこれらの株より蛋白質を抽出し、二次元電気泳動により発現している蛋白質に違いがあるかどうか、特徴的な泳動パターンがあるかどうかを検討した。17の臨床分離株(侵襲性歯周炎群:8、慢性歯周炎群:9)およびT.forsythensisATCC43037(標準株)を血液寒天培地および液体培地で培養後、Tris bufferによる洗浄、TCAにより蛋白質抽出・濃縮を行い、二次元電気泳動を行った。その結果、T.forsythensis全菌体では主に酸性蛋白質(p12-7)が認められ、標準株と慢性歯周炎群の株では同じような泳動パターンが認められた。侵襲性歯周炎群のものからは一部で標準株と異なるスポットが認められたが、すべての株で共通するものは見いだせず、これらが病原性の違い、また歯周病の病態の違いにまで影響しているかどうかを断定することはできなかった。サンプル数を増やしていくことにより差異が認められる可能性はあると思われる。また、十分液体培地での培養期間を変えると認められるバンドパターンが変化することから、T.forsythensis培養条件など外的環境に影響を受けやすく、発現する蛋白が大きく変化している可能性が高いと思われ、これが病原性に関係する可能性があると思われた。

当通过AP-PCR分析时，从一组以快速进展和严重破坏为特征的浸润性牙周炎的T. Forsythensis的临床分离株，以及一组以缓慢进展的慢性牙周炎，观察到两组在两组中检测到的基因型差异。因此，从这些菌株中提取蛋白质，并检查了二维电泳表达的蛋白质是否存在差异，以及是否存在独特的运动模式。 17临床分离株（侵入性牙周炎组：8，慢性牙周炎组：9）和T. Forsythensis ATCC43037（标准菌株）在血琼脂培养基和液体培养基中培养，然后用TRIS缓冲液洗涤，用TCA萃取并浓缩，并进行2D电泳。结果，主要在所有T. forsythensis细胞中观察到酸性蛋白（P12-7），并且在标准菌株和慢性牙周炎菌株中观察到相似的迁移模式。在侵袭性牙周炎组中发现了与标准菌株不同的一些斑点，但是在所有菌株中都没有发现它们，并且不可能确定这些斑点是否对牙周疾病的致病性或病理学差异有任何影响。通过增加样品数量，可能会观察到差异。此外，由于在充分液体培养基中的培养周期变化时，带状模式识别出它易受外部环境（例如t. forsythensis培养条件）的影响，并且表达的蛋白质可能经历了重大变化，这可能与致病性有关。