マウスおよびヒト加齢卵子におけるオーロラ蛋白およびミトコンドリアの機能変化の解析

小鼠和人类老化卵母细胞中极光蛋白和线粒体功能变化的分析

• 批准号: 17791099
• 负责人: 渡邉 誠二
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791099/
• 关键词: 卵子; 精子; 染色体異常; オーロラ蛋白; チューブリン; 染色体; 細胞骨格; 加齢; 微小管

【実験】誘発排卵時に得られる未成熟卵子は体外培養することでMII期へと移行し成熟卵子となる。このヒトIVM卵子には高頻度に姉妹染色分体早期分離(PSC)が生じるとともに受精後の胚盤胞発生率が低いという加齢卵子と共通の特徴がみられる。このことから我々はIVM卵子を加齢卵子の救済法研究のモデルとして実験利用し、GV期にタキソール処理することで上述の加齢卵子と共通の特徴が改善されることを既に報告した。今回はタキソール処理したIVM卵子において細胞骨格の構成要素である微小管及び染色体の配列と分配に関わるオーロラ蛋白の分布を蛍光免疫染色法により検索した。採卵時に得られたGV卵子を0.05μg/m1タキソールで2時間処理し、処理直後及び体外培養後のMII期にホルマリン固定した。PBSで卵子を洗浄後、一次抗体にマウス抗チューブリン抗体及びウサギ抗オーロラA抗体を、二次抗体にローダミン標識抗マウス抗体及びFITC標識抗ウサギ抗体を用いて免疫染色を行った。タキソール未処理群を対照とした。また抗体の有効性を確認するためマウスGV期及びMII卵子をポジティブコントロールに用いた。【結果】ヒトGV期において未処理群ではチューブリンが表層に分布したのに対しタキソール処理群では細胞質全体に分布する傾向があった。ヒトMII期では未処理及び処理群共にチューブリンは紡錘体を形成するとともに表層に分布した。マウスGV期及びMII期においてもヒト卵子対照群と同様の傾向であった。一方、オーロラ蛋白はヒト卵子では核への局在が認められなかったが、マウスではGV期及びMII期共にDNAに強く局在していた。【結論】タキソール処理によりチューブリンが細胞質全体に分布することでPSCが抑制されている可能性が示唆された。ヒト卵子ではオーロラA分布がマウスと異なる可能性が示唆されたが、染色条件などの影響も考えられた。

[实验] 诱导排卵过渡到MII期时获得的未成熟卵母细胞，通过体外培养成为成熟卵母细胞。这些人类 IVM 卵母细胞与老化卵母细胞具有共同特征，包括姐妹染色单体 (PSC) 过早分离的频率高以及受精后囊胚发育率低。为此，我们实验性地使用IVM卵母细胞作为模型来研究如何拯救老化卵母细胞，并且已经报道了在GV期用紫杉醇处理改善了上述老化卵母细胞共有的特征。这次，我们使用荧光免疫染色来研究紫杉醇处理的 IVM 卵母细胞中极光蛋白的分布，这些蛋白参与微管的排列和分布，微管是细胞骨架和染色体的组成部分。收集卵母细胞时获得的GV卵母细胞用0.05μg/ml紫杉醇处理2小时，处理后立即在福尔马林中固定，并在体外培养后的MII阶段。用PBS清洗卵后，使用小鼠抗微管蛋白抗体和兔抗Aurora A抗体作为一抗，以及罗丹明标记的抗小鼠抗体和FITC标记的抗兔抗体作为二抗进行免疫染色。未用紫杉醇处理的组作为对照。此外，为了确认抗体的有效性，使用小鼠GV期和MII期卵作为阳性对照。 [结果]在人GV阶段，未处理组的微管蛋白分布在表层，而紫杉醇处理组则倾向于分布在整个细胞质中。在人MII阶段，未处理组和处理组的微管蛋白均形成纺锤体并分布在表层。在小鼠 GV 和 MII 阶段观察到与人卵母细胞对照组相同的趋势。另一方面，Aurora 蛋白并不定位于人类卵母细胞的细胞核，但在小鼠 GV 和 MII 阶段强烈定位于 DNA。 [结论] 我们的结果表明，紫杉醇治疗可能通过将微管蛋白分布在整个细胞质中来抑制 PSC。有人提出，Aurora A 在人类卵子中的分布可能与小鼠中的不同，但也有人认为染色条件可能会产生影响。

项目成果

核置換卵子の染色体異常

核置换后卵母细胞染色体异常

• 发表时间: 2007
• 期刊: 日本生殖医療エンジニアリング研究会 2・1
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二;渡邉 誠二
• 通讯作者: 渡邉 誠二

核置換卵子の活性化と染色体分配

核替代卵母细胞激活和染色体分离

• 发表时间: 2008
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二;渡邉 誠二;渡邉誠二
• 通讯作者: 渡邉誠二

核置換卵子の発生と染色体分配

具有核置换和染色体分离的卵母细胞发育

• 发表时间: 2008
• 期刊: 産婦人科の実際 (印刷中)
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二
• 通讯作者: 渡邉誠二

タキソール処理IVM卵子の染色体と発生

紫杉醇处理的 IVM 卵的染色体和发育

• 发表时间: 2007
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二;渡邉 誠二;渡邉誠二;渡邉誠二
• 通讯作者: 渡邉誠二

老齢雌由来マウスMII卵子の染色体に及ぼす核置換の影響

核置换对老年雌性小鼠 MII 卵染色体的影响

• 发表时间: 2007
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二;渡邉 誠二;渡邉誠二;渡邉誠二;渡邉誠二;Seiji Watanabe;渡邉誠二
• 通讯作者: 渡邉誠二