Hartnup病原因遺伝子B^0AT1の上皮頂上膜移行を制御する結合蛋白質の解析

控制 Hartnup 致病基因 B^0AT1 上皮顶膜迁移的结合蛋白分析

• 批准号: 17790560
• 负责人: 平田 拓
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790560/
• 关键词: トランスポーター; モータータンパク質; 酵母Two-hybrid法; メンブレンソーティング; アミノ酸; 結合タンパク質; 分子生物学; 細胞内局在

Hartnup病は、腎近位尿細管及び小腸上皮での中性アミノ酸の吸収が阻害される常染色体劣勢の遺伝性疾患であり、その原因遺伝子としてアミノ酸輸送系B^0の分子実体であるB^0-type amino acid transporter 1(B^0AT1)が関与することが報告されている。本研究期間中に、我々はこのB^0AT1の機能を制御している蛋白質を同定すべく、この輸送体に結合する蛋白質の同定及びその生理的機能の解析を行ってきた。B^0AT1のC末端領域をBaitとした酵母Two-hybrid法により、モーター蛋白質であるdynein複合体に結合するTctex-1の同定に成功した。生化学的手法であるin vitro pull down法および免疫沈降法により、両者の結合を確認した。実際にTctex-1のB^0AT1との関わりを調べるために、siRNAを用いたTctex-1のノックダウン実験により、MDCKII cellにおいてB^0AT1の頂端膜への移行が阻害されることを確認した。さらに全身諸臓器の中で、少なくとも腎臓の近位尿細管におけては両者が局在していることを示し、生体内においてTctex-1によりB^0AT1の機能が制御されていることが示唆された。本研究により、膜タンパク質であるトランスポーターも、細胞内でモータータンパク質による輸送を受けているという世界で最初の知見を示すこととなった。

Hartnup 病是一种常染色体隐性遗传病，肾近曲小管和小肠上皮对中性氨基酸的吸收受到抑制，致病基因是 B^，氨基酸转运系统 B^0 的分子实体。据报道，0型氨基酸转运蛋白1（B^0AT1）参与其中。在本研究期间，我们鉴定了与该转运蛋白结合的蛋白质，并分析了其生理功能，以鉴定控制 B^0AT1 功能的蛋白质。采用酵母双杂交方法，以 B^0AT1 的 C 端区域为诱饵，成功鉴定了与运动蛋白动力蛋白复合物结合的 Tctex-1。采用体外pull down法、免疫沉淀法等生化方法证实两者之间的结合。为了实际研究Tctex-1和B^0AT1之间的关系，我们使用siRNA进行了Tctex-1敲低实验，并证实B^0AT1向顶膜的易位在MDCKII细胞中受到抑制。此外，我们表明，两者至少都位于各个全身器官中的肾近曲小管中，这表明B^0AT1的功能在体内是由Tctex-1调节的。这项研究提供了世界上第一个关于转运蛋白（膜蛋白）也由细胞内的运动蛋白转运的知识。

项目成果

Functional characterization of a novel prostaglandin-specific organic anion transporter (OAT-PG).

新型前列腺素特异性有机阴离子转运蛋白（OAT-PG）的功能表征。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J Pharmacol Sci (In press)
• 作者: Anzai N;Hirata T;Koizumi A;Kanai Y;Hirata T et al.
• 通讯作者: Hirata T et al.

トランスポーターの異常と疾患-総論-

转运蛋白异常和疾病-概述-

• 发表时间: 2005
• 期刊: 臨床化学 34
• 作者: Anzai N;Hirata T;Koizumi A;Kanai Y;Hirata T et al.;Anzai N;Furutani Y;安西尚彦
• 通讯作者: 安西尚彦

Identification of the binding protein for a neutral amino acid transporter B^0AT1 related to Hartnup disorder that controls its apical sorting.

鉴定与控制其顶端分选的 Hartnup 紊乱相关的中性氨基酸转运蛋白 B^0AT1 的结合蛋白。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J Pharmacol Sci (In press)
• 作者: Anzai N;Hirata T;Koizumi A;Kanai Y
• 通讯作者: Kanai Y

腎におけるプロスタグランジンシグナリングの新展開

肾脏前列腺素信号传导的新进展

• 发表时间: 2007
• 期刊: Annual Review 2007 腎臓、中外医学社
• 作者: 平田拓;金井好克
• 通讯作者: 金井好克

Functional characterization of rat organic anion transporter 5 (Slc22a19) at the apical membrane of renal proximal tubules

• DOI: 10.1124/jpet.105.088583
• 发表时间: 2005-11-01
• 期刊: JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Anzai, N;Jutabha, P;Anzai, N
• 通讯作者: Anzai, N