遺伝子導入マウスを用いたT細胞の機能制御と低酸素での転写因子DEC1の機能解析

转基因小鼠缺氧条件下 T 细胞功能的控制和转录因子 DEC1 的功能分析

基本信息

批准号：
17790193
负责人：
宮崎和子
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790193/
关键词：
T細胞細胞分化トランスジェニックマウス

项目摘要

本年度は、T細胞特異的に発現する転写因子DEC1のトランスジェニックマウス(Tg)を用いて、胸腺内T細胞分化および末梢T細胞におけるDEC1の機能解明を目的として、以下のように実施した。(1)IL-7Rからのシグナル伝達は、T細胞の分化やsurviveなど全般的に作用している必須のものである。IL-7Rの発現は厳密に調節されており、その調節が細胞系列決定や免疫応答の調節に非常に重要な役割を果たしている。本研究により、DEC1 Tgマウスでは胸腺内T細胞分化においてIL-7Rの発現が低下していることが判明した。そこで、IL-7R遺伝子の調節領域をレポーター遺伝子につなぎ、ルシュフェラーゼアッセイを行ったところ、DEC1の強制発現によって転写活性が抑制されることが判明した。(2)DEC1 Tgでは、CD4+/CD62LナイーブT細胞の細胞数が減少している。そこでDEC1がナイーブT細胞にどのように作用しているかを明らかにするために、DEC1 TgからナイーブT細胞を分離し、T細胞受容体(TCR)シグナルによる細胞増殖とサイトカイン(IL-2)の産生を検討した。細胞増殖についてはBrdUの取り込みとCFSEラベル法による分裂回数を検討したところ、DEC1 Tg細胞はコントロール細胞と比較してBrdUの取り込みに差がなく、分裂回数にも差は見られなかった。一方、DEC1 TgCD4+細胞のIL-2産生が著しく減少していることが判明した。さらに、アネキシンV染色によるアポトーシスを検討したところ、DEC1 Tg T細胞においてアポトーシスが亢進していることが判明した。以上の結果から、DEC1は胸腺内T細胞分化においてIL-7R遺伝子発現調節を行うこと、およびナイーブT細胞の維持に関与する事が新たに判明し、本研究結果はT細胞の全ての主要な局面に必要な制御因子であることを初めて示した。

今年，我们使用T细胞特异表达的转录因子DEC1的转基因小鼠（Tg）来阐明DEC1在胸腺内T细胞分化和外周T细胞中的功能，如下。 (1) IL-7R 的信号转导对于 T 细胞的分化和存活至关重要。 IL-7R的表达受到严格调控，其调控在细胞谱系决定和免疫反应调节中发挥着非常重要的作用。这项研究表明，DEC1 Tg 小鼠在胸腺内 T 细胞分化过程中 IL-7R 的表达降低。因此，当他们将IL-7R基因的调控区与报告基因连接并进行荧光素酶测定时，他们发现DEC1的强制表达抑制了转录活性。 (2)在DEC1 Tg中，CD4+/CD62L幼稚T细胞的数量减少。因此，为了阐明DEC1如何作用于幼稚T细胞，我们从DEC1 Tg中分离幼稚T细胞，并通过T细胞受体（TCR）信号研究细胞增殖和细胞因子（IL-2）的产生。关于细胞增殖，我们使用CFSE标记方法检查了BrdU掺入和分裂数量，发现DEC1 Tg细胞与对照细胞相比，BrdU掺入和分裂数量没有差异。另一方面，发现DEC1 TgCD4+细胞中IL-2的产生显着减少。此外，当通过Annexin V染色检查细胞凋亡时，发现DEC1 Tg T细胞中细胞凋亡增强。从上述结果中，新发现DEC1在胸腺内T细胞分化过程中调节IL-7R基因表达，并参与幼稚T细胞的维持，首次表明这是该阶段的必要控制因子。。