単一皮膚感覚受容器の刺激感受性と発現遺伝子の並列的解析による細胞特異的因子の同定

通过平行分析单一皮肤感觉受体的刺激敏感性和表达基因来识别细胞特异性因素

基本信息

批准号：
17790159
负责人：
片野坂公明
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、「生体単一細胞の生理機能分類」と「発現遺伝子に基づく細胞タイプの分類」とを対応づける手法の確立を目的とし、その第一段階として、生体DRGでの単一神経細胞の電気生理学的記録を試みた。平成19年度は以下の研究を実施した。1、生体ラットを用いたin vivoパッチクランプ法による単一DRG細胞応答の記録昨年度に引き続き、麻酔下ラット腰部脊髄後根神経節(DRG)からの単一感覚神経細胞の全細胞記録の確立を目指した。まず、皮膚を支配する神経細胞を他と区別して標識するために、実験に用いる動物の皮膚に蛍光色素DiIを注入し、逆行性標識に適した条件を決定した。これまでに百例に近い手術を行ない、座骨神経およびその末梢受容野との神経連絡を保ったまま腰部DRGを体外へ導出した標本の作成にはほぼ成功した。この標本を用いて、一昨年度に構築したin vivoパッチクランプ実験装置により、DRGからの全細胞記録方法を行うための手法と装置の改良を行った。このステップでは、昨年度、顕微鏡下での微細操作時にDRGからの赤血球の漏出による視野の悪化が最大の問題点であったため、酵素処理条件(酵素濃度、投与時間、投与圧、流速、酵素の回収方法等)と、出血の防止方法(血管収縮剤、止血剤等の添加)を検討した。血液凝固剤は血球の大きな凝集により視野を悪化させたが、血流を完全には抑えない程度の低容量のノルアドレナリンにより出血傾向は改善した。その他様々な改良により、微細操作の効率と細胞の状態が改善され、数例において神経細胞への良好な電極の接触(ギガシール)が可能であったが、安定して良好な細胞を得ることは難しく、神経活動の記録には到らなかった。2、培養DRG細胞での温度・機械応答の記録および発現する受容体のsingle cell RT-PCR解析上記において、単一細胞からの記録に成功しなかったため本解析は実施していない。

在这项研究中，目的是建立一种支持“活体细胞的生理功能分类”和“基于表达基因的细胞类型的分类”的方法，作为第一步，是神经细胞的单一神经神我试图记录一种电生理学。 2007年，进行了以下研究。 1。通过体内斑块夹的单个DRG细胞响应，使用活体大鼠记录，用于从麻醉大鼠大鼠后根神（DRG）的所有单个感官北部细胞的记录。首先，为了区分控制皮肤与其他皮肤的神经细胞，将荧光染料DII注入了实验中使用的动物的皮肤，并确定了适合逆行体征的条件。到目前为止，进行手术接近一百例，并创建一种标本，该标本从体内衍生出来，同时保持随机神经及其周围接收之间的神经接触几乎是成功的。使用此标本，去年构建的体内贴片夹具实验设备改善了从DRG执行所有细胞记录方法的方法和设备。在此步骤中，去年，由于在显微镜下，由于红细胞泄漏导致红细胞泄漏而导致的视野恶化是最大的问题，因此酶处理条件（酶浓度，给药时间，时间，给药时间检查了给药压力，流速和酶的收集（方法等）以及如何防止出血（加入血管，止血等）。由于血细胞的聚集大量聚集，血液凝结剂会恶化其视野，但由于低自能力甲肾上腺素而导致的出血趋势，这并不能完全控制血液。其他各种改进都提高了良好的效率和细胞状况，并且能够在几种情况下接触良好的电极（GIGASIL），但要获得稳定和良好的细胞，这不是神经活动的记录。 2。文化DRG细胞记录细胞中温度和机器反应的记录，并且尚未实施受体单细胞RT-PCR分析，因为尚未成功记录来自单个细胞的记录。