妊娠期における葉酸の体内動態とトランスポーターの機能評価

妊娠期叶酸药代动力学和转运蛋白功能评价

基本信息

批准号：
17790108
负责人：
平野剛
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790108/
关键词：
葉酸妊娠トランスポーター胎盤ホルモン FRα 輸送防御機構 BCRP

项目摘要

1.葉酸欠乏時のヒト胎盤由来BeWo細胞における葉酸輸送機構の評価BeWo細胞における葉酸の取り込みは、pHの低下によって増大する傾向を示した。一方、葉酸欠乏条件下、pH7.5における葉酸の取り込みは顕著に増大した。さらに、メトトレキサートおよびプテロイン酸、すなわち葉酸構造類似物を用いて阻害実験を行い基質特異性について評価した結果、葉酸欠乏条件下において、その取り込みは有意に阻害された。また、葉酸欠乏によってBCRPの量的および機能的変化は認められなかった。以上の結果より、葉酸欠乏によって変化する輸送担体はpH7.4において高い輸送活性および親和性を有しており、pH5.5において活性が増大する輸送担体とは異なるものであることが示唆された。葉酸欠乏時に葉酸取り込みを増大させた輸送担体を同定することを目的とし、FRαおよびRFCのmRNA発現量を比較した結果、葉酸欠乏時にはそれら両者ともに減少していることが認められた。2.ヒト胎盤における葉酸輸送機構胎盤形成初期の胎盤絨毛に存在するサイトトロホブラスト細胞のモデルとしてBeWo細胞を用いた。RFCの基質であるthiamine pyrophosphate (TPP)は、pH5.5およびpH7.5条件下において阻害効果を示さなかった。したがって、葉酸の取り込みにおいてはRFCの関与は小さく、酸性条件下における葉酸取り込みの増大はFRαを介した輸送であることが示唆された。ヒト満期胎盤BBMVの葉酸取り込みは、BeWo細胞と同様にpH依存性を示し酸性条件下で増大した。FRαを膜から乖離させるPI-PLC処理により、酸性条件下の葉酸取り込みは顕著に減少した。さらに、TPPはPI-PLC処理後の葉酸取り込みを有意に阻害したことから、妊娠後期における葉酸取り込みはFRαおよびRFCの両者が関与していることが示唆された。

1.叶酸缺乏期间人胎盘来源的BeWo细胞中叶酸转运机制的评估。随着pH值的降低，BeWo细胞中叶酸的摄取趋于增加。另一方面，在叶酸缺乏的条件下，pH 7.5 时叶酸的吸收显着增加。此外，使用甲氨蝶呤和蝶酸（叶酸的结构类似物）进行抑制实验，以评估底物特异性。结果，在叶酸缺乏的条件下，其摄取被显着抑制。此外，由于叶酸缺乏，未观察到 BCRP 的数量或功能变化。上述结果表明，由于叶酸缺乏而发生变化的转运载体在pH 7.4时具有较高的转运活性和亲和力，与在pH 5.5时活性增加的转运载体不同。为了确定叶酸缺乏期间增加叶酸摄取的转运蛋白，我们比较了 FRα 和 RFC 的 mRNA 表达水平，发现两者在叶酸缺乏期间均下降。 2.人胎盘中的叶酸转运机制BeWo细胞被用作早期胎盘形成期间胎盘绒毛中存在的细胞滋养层细胞的模型。 RFC的底物焦磷酸硫胺素(TPP)在pH5.5和pH7.5条件下没有表现出抑制作用。因此，有人认为RFC对叶酸摄取的参与很小，酸性条件下叶酸摄取的增加是由于FRα介导的转运。与 BeWo 细胞类似，人类足月胎盘 BBMV 中的叶酸摄取具有 pH 依赖性，并且在酸性条件下会增加。 PI-PLC 处理可将 FRα 从膜上分离出来，显着减少酸性条件下叶酸的吸收。此外，PI-PLC 治疗后，TPP 显着抑制叶酸摄取，表明 FRα 和 RFC 均参与妊娠晚期叶酸摄取。