宿主細胞核内に局在する日本脳炎ウイルスコア蛋白質の機能解明

定位于宿主细胞核的日本脑炎病毒核心蛋白的功能阐明

• 批准号: 17780229
• 负责人: 森 嘉生
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780229/
• 关键词: 日本脳炎ウイルス; コア蛋白質; カテプシンL; 宿主蛋白質; 分子ウイルス学

我々はこれまでに、日本脳炎ウイルス(JEV)のコア蛋白質がヌクレオキャプシド形成に関与するだけでなく、一部が核へ移行してJEVが哺乳動物細胞で複製するために重要な役割を演じていることを報告した。また、感染細胞にはウイルス粒子に取り込まれる成熟型コア蛋白質よりも小さなコア蛋白質が検出されることを明らかにした。今回、感染細胞に検出される低分子量コア蛋白質の産生機構を解析した。JEVコア蛋白質のプロセシングに関与する宿主由来酵素を同定するため、JEVの感染細胞とコア蛋白質発現細胞における、蛋白質分解酵素に対する阻害剤やsiRNAの影響を検討した。また、精製コア蛋白質の蛋白質分解酵素によるin vitroでの切断を確認した。さらに、低分子量コア蛋白質の一次構造を検討するため、種々の変異を導入したコア蛋白質を作製した。低分子量コア蛋白質の産生は、システインプロテアーゼ阻害剤(E-64d)、カテプシンL特異阻害剤{Z-FY(t-Bu)-DMK}の添加やカテプシンLに対するsiRNAの導入によって顕著に抑制された。また、カテプシンLの過剰発現によって、低分子量コア蛋白質の産生が促進された。さらに、コア蛋白質は精製カテプシンLによってinvitroで切断されたが、精製カテプシンBでは切断されなかった。また、両末端にエピトープタグを導入したコア蛋白質を発現させると、C末端エピトープによって低分子量コア蛋白質は検出されたが、N末端エピトープでは検出されなかった。さらに、コア蛋白質の17、18および19位のアミノ酸がこのプロセッシングに重要であった。JEV感染細胞において、カテプシンLがコア蛋白質のN末端近傍を切断することが示唆された。JEVコア蛋白質がカテプシンLによってプロセスされる生物学的意義は現在のところ不明であるが、コア蛋白質の多彩な機能を制御している可能性がある。

我们之前已经报道过，日本脑炎病毒（JEV）的核心蛋白不仅参与核衣壳的形成，而且部分易位至细胞核，对JEV在哺乳动物细胞中的复制发挥着重要作用。他们还透露，在受感染的细胞中检测到了一种比成熟核心蛋白更小的并入病毒颗粒的核心蛋白。在这里，我们分析了在感染细胞中检测到的低分子量核心蛋白的产生机制。为了鉴定参与 JEV 核心蛋白加工的宿主衍生酶，我们研究了抑制剂和 siRNA 对 JEV 感染细胞和核心蛋白表达细胞中蛋白水解酶的影响。此外，还证实了蛋白水解酶对纯化核心蛋白的体外切割。此外，为了研究低分子量核心蛋白的一级结构，我们创建了引入各种突变的核心蛋白。通过添加半胱氨酸蛋白酶抑制剂(E-64d)、组织蛋白酶L特异性抑制剂{Z-FY(t-Bu)-DMK}以及引入针对组织蛋白酶L的siRNA，显着抑制低分子量核心蛋白的产生.此外，组织蛋白酶L的过度表达促进了低分子量核心蛋白的产生。此外，核心蛋白在体外被纯化的组织蛋白酶 L 裂解，但不能被纯化的组织蛋白酶 B 裂解。此外，当表达在两端引入表位标签的核心蛋白时，通过C端表位检测到低分子量核心蛋白，但不通过N端表位检测到。此外，核心蛋白 17、18 和 19 位的氨基酸对于该加工也很重要。有人认为，组织蛋白酶 L 会切割 JEV 感染细胞中核心蛋白的 N 末端。目前尚不清楚组织蛋白酶L加工JEV核心蛋白的生物学意义，但它可能控制核心蛋白的各种功能。

项目成果

Critical role of PA28{gamma} in hepatitis C virus-associated steatogenesis and hepatocarcinogenesis

PA28{gamma} 在丙型肝炎病毒相关脂肪形成和肝癌发生中的关键作用

• 发表时间: 2006
• 期刊: Proceedings of the National Academy of Sciences 50
• 作者: Moriishi;K.;Mochizuki;R.;Moriya;K.;Miyamoto;H.;Mori.Y.;Abe;T.;Murata;S.;Tanaka;K.;Miyamura;T.;Suzuki;T.;Koike K.;Matsuura;Y.
• 通讯作者: Y.

Nucleolar protein B23 interacts with Japanese encephalitis virus core protein and participates in viral replication

• DOI: 10.1111/j.1348-0421.2006.tb03789.x
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
• 影响因子: 2.6
• 作者: Tsuda, Y;Mori, Y;Matsuura, Y
• 通讯作者: Matsuura, Y