可逆的酸化還元反応による転与調節タンパクの活性制御機構

通过可逆氧化还原反应调节转移调节蛋白活性的机制

基本信息

批准号：
05780493
负责人：
垰和之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780493/
关键词：
アワチベータストレス応答 Redox制御

项目摘要

大腸菌OxyRタンパクは、細胞が酸素ストレスに晒された時に発現する遺伝子群の転写活性化タンパクである。この研究では、酸化ストレス下で起こるOxyR蛋白の活性化は蛋白内のどの場所のどのような修飾によるのかを明かにすること、及び、活性型OxyR蛋白を還元して不活性型に変換する酵素(現在、同定されていない)を同定し、その働きを調べることにより、酸化還元による蛋白の機能制御機構を明かにすること目的とした。今年度は、次のような結果が得られた。1)蛋白質内のメチオニンの酸化型であるメチオニンスルホキシドを還元する酵素であるメチオニンスルホキシド還元酵素の遺伝子をクローン化した。このクローン化した遺伝子を用いて、OxyRの活性制御にメチオニンの酸化型が関与している可能性を検討した結果、メチオニン残基の関与はないことが明かとなった。2)OxyR蛋白によって発現の調節されている遺伝子を解析している過程でクローン化した遺伝子の内の一つについて塩基配列の解析の結果、この遺伝子のコードする蛋白は、蛋白質の酸化還元反応に関与している可能性のあることが解った。現在、この蛋白質がOxyR蛋白の活性制御に関与しているかどうかを調べるため、この蛋白質の増産、精製と、この遺伝子を欠く変異株の作成を行っている。3)OxyR蛋白の機能ドメイン解析を行うため、oxyR遺伝子にランダムな変異を導入したライブラリーを作成した。このライブラリーの中から、レドックス応答能を失った変異体を選択した。現在このクローンの詳細な解析を行っている。

大肠杆菌 OxyR 蛋白是一组基因的转录激活蛋白，这些基因在细胞暴露于氧应激时表达。在这项研究中，我们的目的是阐明在氧化应激下导致 OxyR 蛋白激活的蛋白质修饰的位置和类型，并鉴定减少 OxyR 蛋白活性形式并将其转化为非活性形式的酶。目前尚未鉴定），通过研究其功能，我们旨在阐明氧化还原控制蛋白质功能的机制。今年，取得了以下成果。 1) 我们克隆了蛋氨酸亚砜还原酶的基因，这是一种还原蛋氨酸亚砜（蛋白质中蛋氨酸的氧化形式）的酶。使用这个克隆的基因，我们研究了甲硫氨酸的氧化形式参与OxyR活性调节的可能性，并且很明显甲硫氨酸残基不参与其中。 2)在分析受OxyR蛋白调节表达的基因的过程中，对克隆的一个基因进行核苷酸序列分析，结果发现该基因编码的蛋白参与蛋白氧化还原反应。他们可能参与其中。目前，为了研究该蛋白是否参与调节OxyR蛋白的活性，我们正在增加该蛋白的产量和纯化，并创建缺乏该基因的突变菌株。 3）为了分析OxyR蛋白的功能域，我们创建了一个文库，其中在oxyR基因中引入了随机突变。从这个文库中，我们选择了失去氧化还原反应能力的突变体。我们目前正在对该克隆进行详细分析。