精製ダニ抗原刺激後のアトピー性皮膚炎患者末梢血単核球上のFcepsilonRIIの発現について

纯化蜱抗原刺激特应性皮炎患者外周血单个核细胞中FcepsilonRII的表达

基本信息

批准号：
05770620
负责人：
前田啓介
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770620/
关键词：
アトピー性皮膚炎 FcepsilonRII CD23 ダニ末梢血単核球 flow cytometry

项目摘要

FcepsilonRII/CD23はIL-4により、リンパ球、単球、マクロファージ、好酸球などで誘導され、IgEの関与した免疫反応において重要な役割を果たしていると考えられている。ADにおいては、末梢血中のCD23陽性細胞の比率は臨床的に重症な患者ほど高く、CD23の積極的な関与が想定されている。そこでわれわれは、in vitroにおいて、ダニ抗原に感作されたAD患者末梢血単核球(PBMC)を精製ダニ抗原で刺激し、それによって発現されるCD23をflow cytometryを用いて検討した。対象は、mite-sensitive AD患者10名、mite-nonsensitive AD患者4名、アトピー歴のない正常者5名を対象とした。AD患者末梢血より分離したPBMCを10%FCS加RPM11640培養液で1x10^6cells/mlに調整し、200mul/wellずつ96穴平底マイクロプレート(Corning社)に分注した。次にダニ抗原を蛋白濃度として20mug/mlとなるように添加し、37℃、CO_2インキュベータで培養した。培養液に添加するダニ抗原は抗DF虫体抗体を結合させたカラムを用いて回収したaffinity purified DF-bodyを用いた。mite-sensitiveなAD患者では、PBMC上のCD23の発現はspontaneousと比較して有意に上昇した(P<0.005)。mite-nonsensitiveAD患者および正常人においては、CD23の有意の上昇は認めなかった。同時にTおよびBリンパ球上のCD23発現をtwo color分析で行ったところ、helper T細胞、suppressor T細胞、B細胞いずれにおいても、CD23陽性細胞は有意に増加した。このようにmite-sensitive AD患者とmite-nonsensitive AD患者および正常人では、CD23の発現に有意の反応性の違いが認められた。このように、AD患者のPBMC上のCD23発現率は高く、in vitroにおいて、抗原刺激によりさらにCD23が特異的に誘導されることが明らかとなった。CD23分子の役割については、なお不明の点も多いが、CD23分子の発現は、IgE依存性の反応をさらに増幅させるものと考えられる。

FcepsilonRII/CD23由淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞等中的IL-4诱导，被认为在IgE相关的免疫反应中发挥重要作用。在AD中，临床重症患者外周血中CD23阳性细胞的比例较高，推测CD23积极参与其中。因此，我们用纯化的蜱抗原在体外刺激对蜱抗原敏感的AD患者外周血单核细胞（PBMC），并使用流式细胞术检查CD23的表达。受试者包括 10 名对螨虫敏感的 AD 患者、4 名对螨虫不敏感的 AD 患者和 5 名无过敏史的正常受试者。从AD患者外周血中分离的PBMC用补充有10％FCS的RPM11640培养基调整至1x10^6细胞/ml，并以200μl/孔分配到96孔平底微孔板(Corning)中。接下来，以20mg/ml的蛋白质浓度添加蜱抗原，并在CO_2培养箱中37℃培养。作为添加到培养液中的蜱抗原，使用使用结合有抗DF昆虫抗体的柱回收的亲和纯化的DF体。在螨敏感型AD患者中，PBMC上CD23的表达较自发性显着升高（P<0.005）。在对螨不敏感的 AD 患者或正常受试者中，未观察到 CD23 显着增加。同时，对T和B淋巴细胞上CD23表达的双色分析显示，辅助性T细胞、抑制性T细胞和B细胞中CD23阳性细胞显着增加。因此，在对螨敏感的AD患者、对螨不敏感的AD患者和正常受试者之间观察到CD23表达的显着差异。由此表明，AD患者的PBMC上CD23的表达率较高，且体外抗原刺激进一步特异性诱导CD23。尽管关于 CD23 分子的作用仍有许多未知之处，但 CD23 分子的表达被认为会进一步放大 IgE 依赖性反应。