低反応レベルレーザー療法におけるナトリウムチャンネルブロックの原理

低反应激光治疗钠通道阻滞原理

• 批准号: 16700406
• 负责人: 前島 洋
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16700406/
• 关键词: レーザ; ナトリウムチャンネル; パッチクランプ法

低反応レベルレーザー治療は疼痛の抑制治療法として、星状神経節ブロックや各末梢神経軸索への照射に汎用されている。神経ブロックに作用する点から神経伝導の素子である電位依存性Na^+チャンネルに何らかの影響が与えていると推察されるが、その生理学的機構については不明な点が多い。現在、複数のNa^+チャンネルアイソフォームがクローニングされているが、低反応レベルレーザー照射の影響がアイソフォームに特異的であれば、チャンネル蛋白に直接的な影響が生じていることが示唆される。そこで、本研究では、これらのアイソフォームをそれぞれHEK293細胞に再発現させ、パッチクランプ法の全細胞電流計測により、低反応レベルレーザー照射の影響におけるアイソフォーム間での差異を検討することを目的に実験を進めた。本年度は再発現系におけるチャンネル蛋白の発現の確立とパッチクランプ計測における低反応レーザー照射法の再現性の確立に努めた。HEK293細胞の再発現に関しては、Na_v1.2、Na_v1.3、Na_v1.4、Na_v1.5の再発現を試み、Na_v1.2、Na_v1.4、Na_v1.5についてはチャンネル分子の主要機能を有すαサブユニット単独でも実験に十分なNa+電流を確認できたが、Na_v1.3についてはチャンネルの細胞膜への輸送を促通すると考えられているβサブユニットを共発現させても、チャンネル発現が確認されなかった。パッチクランプ法計測における顕微鏡チヤンバー内の細胞への照射法に関しては、臨床的に用いられる直接的な照射では、焦点距離等によるバイアスが多く、アイソフォーム間の感受性を比較するのには不適切であることが判明した。このため、顕微鏡の蛍光システムを代替したレーザー照射システムの作成により、細胞に対する均一な照射を試みている。

低响应水平的激光治疗通常用作抑制疼痛的治疗方法，用于照射星状神经节块和各种周围神经轴突。据估计，从作用在神经阻滞的点开始，对电压依赖性的Na^+通道有一些影响，这是神经传导元件的影响，但是关于其生理机制有许多未知数。尽管现在已经克隆了多个Na^+通道同工型，但如果低反应水平激光照射的作用是同工型的，则建议对通道蛋白产生直接影响。因此，在这项研究中，我们进行了一项实验，目的是重新表达HEK293细胞中的这些同工型，并使用斑块夹方法测量总细胞电流，以检查低反应水平激光辐照的效果中同工型之间的差异。今年，我们努力在重新表达系统中建立通道蛋白的表达，并确定用于贴片夹测量的低反应激光照射方法的可重复性。关于HEK293单元的重新表达，我们试图重新表达Na_v1.2，Na_v1.3，Na_v1.4和Na_v1.5，以及Na_v1.2，Na_v1.4和Na_v1.4和Na_v1.5，na_v1.4和Na_v1.5，α亚基，有足够的na_ sundifience。当被认为促进通道向细胞膜的运输的β亚基被共表达时。关于斑块夹测量中显微镜通道中细胞的辐照方法，临床上使用的直接照射涉及由于焦距等的巨大偏见，并且发现不适合比较同工型之间的敏感性。因此，通过创建取代显微镜的荧光系统的激光照射系统来尝试对细胞的均匀照射。