低反応レベルレーザー療法におけるナトリウムチャンネルブロックの原理

低反应激光治疗钠通道阻滞原理

• 批准号: 16700406
• 负责人: 前島 洋
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16700406/
• 关键词: レーザ; ナトリウムチャンネル; パッチクランプ法

低反応レベルレーザー治療は疼痛の抑制治療法として、星状神経節ブロックや各末梢神経軸索への照射に汎用されている。神経ブロックに作用する点から神経伝導の素子である電位依存性Na^+チャンネルに何らかの影響が与えていると推察されるが、その生理学的機構については不明な点が多い。現在、複数のNa^+チャンネルアイソフォームがクローニングされているが、低反応レベルレーザー照射の影響がアイソフォームに特異的であれば、チャンネル蛋白に直接的な影響が生じていることが示唆される。そこで、本研究では、これらのアイソフォームをそれぞれHEK293細胞に再発現させ、パッチクランプ法の全細胞電流計測により、低反応レベルレーザー照射の影響におけるアイソフォーム間での差異を検討することを目的に実験を進めた。本年度は再発現系におけるチャンネル蛋白の発現の確立とパッチクランプ計測における低反応レーザー照射法の再現性の確立に努めた。HEK293細胞の再発現に関しては、Na_v1.2、Na_v1.3、Na_v1.4、Na_v1.5の再発現を試み、Na_v1.2、Na_v1.4、Na_v1.5についてはチャンネル分子の主要機能を有すαサブユニット単独でも実験に十分なNa+電流を確認できたが、Na_v1.3についてはチャンネルの細胞膜への輸送を促通すると考えられているβサブユニットを共発現させても、チャンネル発現が確認されなかった。パッチクランプ法計測における顕微鏡チヤンバー内の細胞への照射法に関しては、臨床的に用いられる直接的な照射では、焦点距離等によるバイアスが多く、アイソフォーム間の感受性を比較するのには不適切であることが判明した。このため、顕微鏡の蛍光システムを代替したレーザー照射システムの作成により、細胞に対する均一な照射を試みている。

低响应水平激光疗法广泛用作星状神经节阻滞和周围神经轴突照射的疼痛抑制治疗。由于其作用于神经阻滞，推测其对作为神经传导要素的电压门控Na^+通道有一定作用，但其生理机制尚有许多未知之处。目前，多种Na^+通道异构体已被克隆，如果低响应水平激光照射的效果是异构体特异性的，则表明对通道蛋白有直接影响。因此，在本研究中，我们在 HEK293 细胞中重新表达了这些亚型，并使用膜片钳技术测量了全细胞电流，以检查亚型之间在低响应水平激光照射的影响方面的差异。继续。今年，我们致力于建立再表达系统中通道蛋白的表达以及膜片钳测量中低响应激光照射方法的可重复性。关于HEK293细胞的重新表达，我们尝试重新表达Na_v1.2、Na_v1.3、Na_v1.4和Na_v1.5。尽管我们能够单独使用α亚基确认实验中存在足够的Na+电流，但即使在共表达β亚基时，也确认了Na_v1.3的通道表达，这被认为促进了通道向细胞膜的转运。完毕。关于膜片钳测量中在显微镜室中照射细胞的方法，临床上使用的直接照射由于焦距和其他因素而存在许多偏差，使得其不适合比较亚型之间的灵敏度，事实证明这是有问题的。因此，我们试图通过创建激光照射系统来代替显微镜的荧光系统来均匀地照射细胞。