肝幹細胞であるoval細胞における増殖・分化制御因子の同定および制御機構の解明

肝干细胞卵圆细胞增殖和分化调节因子的鉴定及其控制机制的阐明

• 批准号: 05J11446
• 负责人: 岡部 繭子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J11446/
• 关键词: 肝臓; 幹細胞; オーバル細胞

マウスオーバル細胞の細胞表面抗原分子の探索を行った。オーバル細胞を誘導した肝臓で発現する膜・分泌タンパク質を、シグナルシークエンストラップ法でスクリーニングし、正常時に比較してオーバル細胞誘導時に発現が上昇する膜タンパク質遺伝子として、Epithelial cell adhesion molecule(EpCAM)を同定した。そして、マウスEpCAMに対する抗体を作製した。作製した抗マウスEpCAM抗体を用いた免疫染色により、EpCAMがオーバル細胞に発現していることが示唆された。また、抗EpCAM抗体とセルソーターを用いてオーバル細胞を誘導した肝臓から分離したEpCAM陽性細胞は、既知のオーバル細胞マーカーであるサイトケラチン19やA6に陽性であり、オーバル細胞マーカー遺伝子を発現していた。分離したEpCAM陽性細胞は、in vitroでの培養で旺盛な増殖能を示し、継代培養も可能であった。また、培養したEpCAM陽性細胞では、オーバル細胞マーカー遺伝子の発現が確認された。培養したEpCAM陽性細胞をサブクローニングし、10コの独立したクローンを得た。これらのクローン化した細胞株においても、オーバル細胞マーカー遺伝子の発現が確認された。クローン化した細胞株を用いて、肝細胞および胆管上皮細胞への分化誘導を行った。その結果、いくつかの細胞株が肝細胞と胆管上皮細胞の二種類の細胞への分化能をあわせもつことが明らかとなった。以上の結果から、EpCAMはオーバル細胞のマーカーであり、抗EpCAM抗体を用いてセルソーターによりオーバル細胞を分離できることを明らかにした。

搜索小鼠椭圆形细胞的细胞表面抗原分子。在肝脏中表达的膜/分泌蛋白使用信号测序带方法筛选诱导的椭圆形细胞，并将上皮细胞粘附分子（EPCAM）鉴定为膜蛋白基因，当卵形细胞与正常诱导时，其表达增加。然后制备针对小鼠EPCAM的抗体。使用制备的抗小鼠EPCAM抗体进行免疫染色表明EPCAM在椭圆形细胞中表达。此外，使用抗EPCAM抗体诱导的椭圆形细胞的EPCAM阳性细胞对已知的椭圆形细胞标记细胞标记Cytokeratin 19和A6呈阳性，并表达椭圆形细胞标记基因。分离的EPCAM阳性细胞在体外培养时表现出强大的增殖潜力，并且也可能是亚培养物。此外，在培养的EPCAM阳性细胞中证实了椭圆形细胞标记基因的表达。将培养的EPCAM阳性细胞亚克隆以获得10个独立的克隆。在这些克隆的细胞系中也证实了椭圆形细胞标记基因的表达。克隆的细胞系用于诱导分化为肝细胞和胆管上皮细胞。结果，发现几个细胞系具有分化为两种细胞的能力：肝细胞和胆管上皮细胞。从以上结果表明，Epcam是椭圆形细胞的标志物，并且可以使用抗EPCAM抗体通过细胞分子分离椭圆形细胞。