導入遺伝子に基づく個体発がんの研究

基于导入基因的个体致癌研究

基本信息

批准号：
05152090
负责人：
勝木元也
金额：
$ 6.4万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

がん遺伝子やがん抑制遺伝子に起る多段階的変異を個体レベルで研究するためには、これらの遺伝子に注目した動物実験系が必要である。そこで本研究では、がん遺伝子としてH-ras、がん抑制遺伝子としてp53を選び、トランスジェニックマウスおよびジーンターゲッティングマウスを作成し、それらの個体発がんを調べることにした。1)H-ras遺伝子には、マウスゲノム由来のものが未だ単離されていなかった。そこで、129/svのゲノムライブラリーから単離を試みた結果、全長20Kbに亘り、すべてのエクソンを含むクローンが採れた。ターゲッティングベクターを構築し、ES細胞に導入後、相同組換え体を選択し、現在キメラマウス作成中である。また、マウスゲノム遺伝子導入トランスジェニックマウスの作成を行なった。2)p53遺伝子は、すでに数ケ所でターゲットされているが、我々は、新しい遺伝子置換法を開発し、p53遺伝子をそっくりlacz遺伝子に置き換えたマウスを作成した。その結果、p53遺伝子は、非常に早い初期胚において強く発現しており、その発現の組織特異性に大きな特徴が認められた。また、p53ホモ型変異体は、肉腫、リンパ腫、奇形腫を生後30週までに頻発し死亡する。個体による差は、p53以外の遺伝子に変異が生ずることによってこれらの腫瘍が発生することを意味しているものと考えられるので、この未知遺伝子を同定する試みも開始した。以上のような動物実験系の確立により、いつ、どこで、どのような変異が個体発がんを起すかが解明できると思われる。

为了在个体水平上研究癌基因和抑癌基因发生的多步突变，需要关注这些基因的动物实验系统。因此，本研究选择H-ras作为癌基因，p53作为抑癌基因，构建转基因小鼠和基因靶向小鼠，并研究其个体的致癌作用。 1)尚未分离出源自小鼠基因组的H-ras基因。因此，我们尝试从129/sv基因组文库中分离，结果获得了一个总长度为20 Kb、包含所有外显子的克隆。在构建靶向载体并将其导入ES细胞后，我们选择同源重组体，目前正在创建嵌合小鼠。此外，我们还创造了引入小鼠基因组基因的转基因小鼠。 2）p53基因已经在多个地方被靶向，但我们开发了一种新的基因替换方法并创建了p53基因被lacz基因完全替换的小鼠。结果，p53基因在非常早期的胚胎中强烈表达，并且发现其表达具有高度组织特异性。此外，p53纯合突变体经常罹患肉瘤、淋巴瘤和畸胎瘤，并在出生后30周死亡。个体差异被认为意味着这些肿瘤是由p53以外的基因突变引起的，因此我们开始尝试鉴定这个未知基因。通过建立上述动物实验系统，将有可能阐明何时、何地以及何种类型的突变导致个体癌症。