躁うつ病および統合失調症患者におけるepigeneticな変異の網羅的探索

全面寻找躁狂抑郁症和精神分裂症患者的表观遗传变异

基本信息

批准号：
16790708
负责人：
岩本和也
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の研究から、躁うつ病一卵性双生児不一致例血液由来サンプル(培養リンパ芽球)においてDNAメチル化状態が異なる複数の遺伝子を同定している。本年度は引き続き、躁うつ病において候補遺伝子の同定、および絞り込みのための実験を進めた。まず、薬剤投与前後のDNAマイクロアレイ解析により得られた候補遺伝子に関して、bisulfite sequencing法により双生児間で差異のあることの確認を行った。その結果、双生児間でDNAメチレーションパターンの顕著な差異を認める2遺伝子を同定した。次にこの2遺伝子について、患者および健常者培養リンパ芽球サンプルを用いてDNAメチレーションパターンの差異の分布を統計学的に検討した。このために、患者および健常者リンパ芽球サンプルからゲノムDNAの抽出を行ったあと、bisulfite変換処理を行い、DNAメチル化状態の定量を行った。DNAメチル化状態の定量法として、パイロシークエンス技術を用いたハイスループットな定量手法の確立を新たに行った。確立した本手法および従来の手法を用いて、多数例サンプル(各群N=20)での定量を行ったところ、この2遺伝子に関してはDNAメチレーション状態に統計学的に有意な差異は検出されず、一般の躁うつ病患者集団には適用できない症例特異的なDNAメチレーションの変動である可能性が示唆された。また、確立した定量法を用いて、解析対象領域をより広範囲に広げていくことで、遺伝子発現調節に重要な領域の包括的な解析が可能になると考えられた。

去年的研究在患有躁狂抑郁症的不一致同卵双胞胎的血液样本（培养的淋巴母细胞）中发现了多个具有不同 DNA 甲基化状态的基因。今年，我们继续进行实验来识别和缩小躁狂抑郁症的候选基因。首先，我们通过亚硫酸氢盐测序法确认了双胞胎之间在给药前后通过DNA微阵列分析获得的候选基因存在差异。结果，确定了两个基因，显示双胞胎之间 DNA 甲基化模式存在显着差异。接下来，我们使用来自患者和健康个体的培养淋巴母细胞样本统计研究了这两个基因的 DNA 甲基化模式差异的分布。为此，我们从患者和健康个体的淋巴母细胞样本中提取基因组DNA，进行亚硫酸氢盐转化处理，并量化DNA甲基化状态。我们建立了一种利用焦磷酸测序技术定量 DNA 甲基化的新高通量方法。当使用该建立的方法和常规方法对多个样本（每组N = 20）进行定量时，没有检测到这两个基因的DNA甲基化状态存在统计学上的显着差异，这表明这可能是一种情况。 -DNA甲基化的特定变异不能应用于一般躁郁症患者群体。此外，人们认为，通过使用已建立的定量方法将分析目标区域扩展到更广泛的范围，可以全面分析对调节基因表达重要的区域。