小児急性骨髄性白血病の動物モデルを用いたDIC発症の分子機構の解析

儿童急性髓系白血病动物模型分析DIC发生的分子机制

基本信息

批准号：
16790588
负责人：
林睦
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

われわれは重症DICを合併した小児急性骨髄性白血病(AML)症例からMLL遺伝子再構成を伴う細胞株KOPM-88を樹立し、これを利用し独自の小児AML動物モデルを確立した。小児削L細胞株KOPM-88のNOD/SCIDマウスへの移植により、白血病浸潤に伴うDICの発症について解析した。NOD/SCIDマウスにKOPM-88細胞を尾静脈から静注、あるいは腹腔内投与した。またDICを誘発すべく、さらにTNF-α,TissueFactor, G-CSF, GM-CSF, M-CSF, IL-7等のサイトカインを投与することによりKOPM-88細胞の一次穎粒放出を誘導させ、一定期間後に血小板数、APTT、PT、フィブリノーゲン、D-dimer値の測定の上、解剖し、DICについて病理学的に解析した。その結果、KOPM-88細胞は、NOD/SCIDマウスの骨髄、脊髄、肝臓など諸臓器に白血病浸潤を認め、マウスは5-7週間後に半身麻痺を来した。しかし、血液学的解析では、血小板の減少傾向はみられたものの有意な低下はなく、D-dimerも有意な上昇は見られなかった。解剖所見では、出血傾向や諸臓器におけるフィブリン血栓は明らかでなく、サイトカインによる一次穎粒放出誘導群においても差異は認められなかった。これらの結果は、ヒト白血病細胞がDICを合併する分子機構に種特異性が存在すること、あるいは免疫不全マウスにおける免疫担当細胞の欠如がDICの発症に必要である可能性を示唆していると考えた。また、フラボノイドとその異性体がヒト造血細胞・白血病細胞のMLL遺伝子再構成を惹起するか否かを異種移植系で検討したところ、PCR法、FISH法で検出できる再構成は見出されなかった。

我们从一例儿童急性髓性白血病（AML）并发严重DIC病例中建立了MLL基因重排的细胞系KOPM-88，并以此建立了独特的儿童AML动物模型。我们通过将儿科耗竭 L 细胞系 KOPM-88 移植到 NOD/SCID 小鼠体内，分析了与白血病浸润相关的 DIC 的发展。通过尾静脉静脉内或腹膜内向 NOD/SCID 小鼠施用 KOPM-88 细胞。此外，为了诱导DIC，我们通过施用TNF-α、TissueFactor、G-CSF、GM-CSF、M-CSF和IL-7等细胞因子进一步诱导KOPM-88细胞释放初级沉淀。一定时间后，测量血小板计数、APTT、PT、纤维蛋白原和D-二聚体值，并对动物进行解剖和病理分析以检测DIC。结果，在NOD/SCID小鼠的骨髓、脊髓、肝脏和其他器官中观察到KOPM-88细胞的白血病浸润，并且小鼠在5-7周后出现偏瘫。然而，在血液学分析中，虽然血小板有减少的趋势，但并没有明显的减少，D-二聚体也没有观察到明显的增加。解剖学结果显示各器官没有出血倾向或纤维蛋白凝块，并且在细胞因子诱导初级颗粒释放的组中没有观察到差异。这些结果表明，人类白血病细胞发生 DIC 的分子机制存在物种特异性，或者我认为免疫缺陷小鼠中缺乏免疫活性细胞可能是 DIC 发生所必需的。此外，当我们使用异种移植系统研究类黄酮及其异构体是否会诱导人类造血细胞和白血病细胞中的MLL基因重排时，没有发现可以通过PCR或FISH方法检测到的重排。