グライコミクスによる糖尿病合併症発症の新機序の解明

通过糖组学阐明糖尿病并发症发生的新机制

基本信息

批准号：
16790183
负责人：
山本靖彦
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

糖尿病状態で促進的に形成される後期糖化反応生成物(advanced glycation endproducts、AGE)がAGE特異受容体(receptor for AGE、RAGE)を介して糖尿病合併症の発症・進展に関わることが明らかになってきた。RAGEは一回膜貫通型受容体で、その細胞外領域に2本のN-結合型糖鎖構造をもち、これらの糖鎖付加部位に挟まれたごく狭い領域がAGEリガンド結合部位である。本研究の目的は、RAGEの糖鎖修飾がリガンド結合に与える影響を明らかにすることである。(1)培養血管内皮細胞株ECV304細胞に、野生型、それぞれ片方の糖鎖付加部位(-NXS/T-)のNをAにした変異導入型、両変異導入型の計4種類の組み換えRAGE蛋白を強制発現した。N末端側から2番目のN型糖鎖結合部位への変異導入によって、AGE-BSAに対するVEGF mRNAの発現増強が生じた。(2)培養血管内皮細胞で発現するRAGEの糖鎖修飾には、高血糖、AGE刺激、インスリン負荷のいずれにおいても、あるいは3者同時負荷においても影響が生じなかった。しかし、50mg/dl以下の低血糖暴露で糖鎖修飾がほぼ完全に阻害されることが明らかになった。(3)糖尿病あるいは非糖尿病正常マウスの脳、肺、腎、小腸からタンパクを抽出し、RAGE糖鎖修飾の有無をウエスタンブロットで推定した。その際に、N型糖鎖を酵素的に外すglycopeptidase-Fを使用した。腎臓においては糖鎖修飾のないRAGEも発現していた。RAGEのN-結合型糖鎖付加修飾がないと、AGEリガンドのRAGEへの結合能が亢進することが明らかとなった。低血糖暴露がRAGEのN-結合型糖鎖付加修飾を阻害する一因子であった。RAGEのリガンド結合部位の糖鎖付加修飾の多様性が糖尿病血管症の発症・進展に関わることがはじめて分子レベルで証明された。

已经明确的是，在糖尿病状态下形成的晚期糖基化终末产物（AGE）通过AGE特异性受体（AGE受体，RAGE）参与糖尿病并发症的发生和进展。 RAGE是一种单跨膜受体，其胞外区有两个N连接的糖链结构，AGE配体结合位点是夹在这些糖链附着位点之间的非常狭窄的区域。本研究的目的是阐明 RAGE 糖基化对配体结合的影响。 (1)将总共4种类型的重组RAGE导入培养的血管内皮细胞系ECV304细胞中：野生型、其中一个糖基化位点(-NXS/T-)变为A的突变型、以及两者突变类型。在 N 末端的第二个 N-聚糖结合位点引入突变，导致 AGE-BSA 响应的 VEGF mRNA 表达增强。 (2)培养的血管内皮细胞中表达的RAGE糖基化不受高血糖、AGE刺激、胰岛素负荷或三者同时负荷的影响。然而，研究表明，糖基化几乎完全被低于 50 mg/dl 的低血糖所抑制。 (3)从糖尿病或非糖尿病正常小鼠的脑、肺、肾和小肠中提取蛋白质，并通过Western blotting评估RAGE糖基化的存在或不存在。当时，我们使用糖肽酶-F，它可以酶促去除 N-聚糖链。没有糖基化的RAGE也在肾脏中表达。研究表明，在RAGE不存在N-连接糖基化修饰的情况下，AGE配体与RAGE的结合能力得到增强。低血糖暴露是抑制 RAGE N-连接糖基化的因素之一。首次在分子水平证明RAGE配体结合位点糖基化修饰的多样性与糖尿病血管病变的发生和进展有关。

项目成果

期刊论文数量（31）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

早期肺癌の術後予後検査方法

早期肺癌术后预后检测方法

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Plasma level of endogenous secretory receptor for advanced glycation endproducts (esRAGE) is associated with components of the metabolic syndrome and atherosclerotic arterial wall thickness.

晚期糖基化终末产物内源性分泌受体 (esRAGE) 的血浆水平与代谢综合征的组成部分和动脉粥样硬化动脉壁厚度相关。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 25(12)
影响因子：
0
作者：
Koyama;H.
通讯作者：
H.

糖尿病性腎症とRAGE

糖尿病肾病和 RAGE

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
糖尿病カレントライブラリー2005 (In press)
影响因子：
0
作者：
Nakajima;M.;et al.;山本靖彦ら
通讯作者：
山本靖彦ら

RAGEポリペプチドの新規用途

RAGE多肽的新用途

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

The N-terminal domain of thrombomodulin sequesters high-mobility group-B1 protein, a novel antiinflammatory mechanism.

DOI：
10.1172/jci22782
发表时间：
2005-05
期刊：
The Journal of clinical investigation
影响因子：
0
作者：
K. Abeyama;D. Stern;Yuji Ito;K. Kawahara;Y. Yoshimoto;Motoyuki Tanaka;T. Uchimura;N. Ida;
通讯作者：
K. Abeyama;D. Stern;Yuji Ito;K. Kawahara;Y. Yoshimoto;Motoyuki Tanaka;T. Uchimura;N. Ida;