動物細胞のDNA鎖切断修復と非相同組換えに関する逆遺伝学的解析

动物细胞中DNA链断裂修复和非同源重组的反向遗传分析

基本信息

批准号：
16790058
负责人：
足立典隆
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトNalm-6細胞およびニワトリDT40細胞を用いて,一本鎖DNA切断修復/塩基除去修復機構の解析を行った。具体的には,DT40細胞のFEN1変異株,DNAポリメラーゼβ変異株,FEN1/DNAポリメラーゼβ二重変異株の表現型解析と,Nalm-6細胞のDNAポリメラーゼβ変異株の作製と表現型解析を行った。その結果,アルキル化剤によるDNA損傷の修復においてショートパッチ経路,ロングパッチ経路がともに重要であるのに対し,酸化的損傷に対してはロングパッチ経路のみが重要であることを明らかにした。この結果は生化学的手法によっても確認できた。また,二本鎖DNA切断修復についても詳細な解析を行った。エンドジョイニング変異株の解析から,エンドジョイニング阻害によりランダムインテグレーションを抑制できることを明らかにした。さらに,本研究では,Nalm-6細胞を用いて,Rad54や,Xrcc3,Ku70,Ku80,DNA ligase III, DNA ligase IなどDNA一本鎖/二本鎖切断修復への関与が示唆される遺伝子およびp53遺伝子について,順次ジーンターゲティングを行った。また,これら遺伝子の二重変異株の作製を進めた。これら一連の変異株を利用して,トポイソメラーゼ阻害剤などの抗がん剤の細胞傷害作用を増強させる方策を考察した。また,DNAligase IV破壊株を詳しく解析した結果,ヒトとニワトリとで表現型が異なることを明らかにした。

使用人Nalm-6细胞和鸡DT40细胞分析单链DNA断裂修复/碱基切除修复机制。具体来说，我们对DT40细胞的FEN1突变体、DNA聚合酶β突变体和FEN1/DNA聚合酶β双突变体进行了表型分析，并对Nalm-6细胞的DNA聚合酶β突变体进行了创建和表型分析。结果表明，短补丁途径和长补丁途径对于修复烷化剂引起的DNA损伤都很重要，而只有长补丁途径对于氧化损伤很重要。这一结果也得到了生化方法的证实。我们还对双链 DNA 断裂修复进行了详细分析。对末端连接突变体的分析表明，可以通过抑制末端连接来抑制随机整合。此外，在本研究中，我们使用Nalm-6细胞来鉴定被认为参与DNA单链/双链断裂修复的基因，例如Rad54、Xrcc3、Ku70、Ku80、DNA连接酶III和DNA连接酶I.对p53基因依次进行基因打靶。我们还继续构建这些基因的双突变株。使用一系列这些突变菌株，我们考虑了增强拓扑异构酶抑制剂等抗癌药物的细胞毒性作用的策略。此外，对 DNAligase IV 破坏菌株的详细分析表明，人类和鸡的表型是不同的。