新規C-結合型糖鎖修飾ペプチドの合成と生物学的意義解明

新型C-连接糖基化肽的合成及其生物学意义的阐明

• 批准号: 16790028
• 负责人: 眞鍋 史乃
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790028/
• 关键词: C-マンノシルトリプトファン; 自然免疫; 白血球; バイオマーカー; 免疫ブロット解析; 抗C-Man化抗体; 接着能阻害; Toll like receptor; マンノシルトリプトファン; トロンボスポンディン; 糖尿病; ELISA法

新規タンパク質翻訳後修飾として見出されたC-マンノシルトリプトファン(C-Man-Trp)を含むペプチドを合成し、生理学的意義の解明に向けての初期的実験を行った。C-Man-Trp含有ペプチドがマクロファージ様RAW264.7においてLPSシグナルに及ぼす影響について検討した。その結果、C-Man-WSPWがLPSシグナルを増強することが明らかになった。また、メカニズムはToll like receptor 4を介するものではないことが示唆された。また、ヒト単球細胞株THP-1とU937をPMA(phorbol-12-myristate-13-acetate)により分化させた細胞をC-Man-Trpに対して作成した抗体を用いて免疫ブロット解析、および蛍光顕微鏡を用いてC-Man-Trpの分布を調べることにより、単球が白血球に分化するにつれて、C-マンノシル化されたタンパク質が細胞表面に増加することを明らかにした。これはC-Man-Trpが単球から白血球への分化のバイオマーカーの役割を果たすものと期待される。C-Man化されたタンパク質は主に分泌系にみられた。興味深いことに分化においてC-Man-Trpの増加にも関わらず、C-Mannosyl transferaseの活性の上昇は見られないことも明らかになった。ヒト単球細胞株であるTHP-1を分化させた細胞にC-Man-Trpを含むペプチドに対して作成したモノクローナル抗体を添加すると細胞接着が抑制されることを見出した。また、RAW264.7においてもこの抗体は細胞接着を抑制した。すなわち、分化誘導した接着能、あるいはすでに獲得している接着能の両者を抑制することが明らかになった。

我们合成了一种含有 C-甘露糖基色氨酸 (C-Man-Trp) 的肽，它被发现是一种新型的蛋白质翻译后修饰，并进行了初步实验以阐明其生理意义。我们研究了含有 C-Man-Trp 的肽对巨噬细胞样 RAW264.7 中 LPS 信号的影响。结果表明，C-Man-WSPW 增强了 LPS 信号。也有人认为该机制不是由 Toll 样受体 4 介导的。此外，使用PMA（佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯）区分人单核细胞系THP-1和U937，并使用针对C-Man-Trp制备的抗体进行免疫印迹分析，通过检查C的分布。 -Man-Trp 使用荧光显微镜，我们发现当单核细胞分化为白细胞时，C-甘露糖基化蛋白在细胞表面增加。这表明 C-Man-Trp 作为单核细胞分化为白细胞的生物标志物发挥作用。 C-Manylated 蛋白主要存在于分泌系统中。有趣的是，尽管分化过程中 C-Man-Trp 增加，但没有观察到 C-甘露糖基转移酶活性增加。我们发现，当将针对含有 C-Man-Trp 的肽制备的单克隆抗体添加到分化的人单核细胞系 THP-1 中时，细胞粘附受到抑制。该抗体还抑制 RAW264.7 中的细胞粘附。即，可知由分化引起的粘附能力和已经获得的粘附能力均被抑制。

项目成果

Comprehensive Glycoscience

综合糖科学

• 发表时间: 2007
• 作者: Oohashi T;Bekku Y;Houliston RS;Van Sorge NM;Van Sorge NM;Overell J;Koga M;Kamitani T;Tatsumoto M;Nagasawa K;Houliston RS;Yoshida T;Funakoshi K;Tatsumoto M;Komagamine T;Gono T;Yuki N;Kimoto K;Comin R;Koga M;Koga M;Koga M;Pandey JP;Yuki N;Li J;Yuki N;Odaka M;Odaka M;Koga M;Hiraga A;Kuwabara S;Goodfellow JA;Takahashi M;Tatsumoto M;Kamitani T;S. Matsumiya;K. Kato;S. Matsumiya;K. Kato;Y.Wada;矢木宏和;S.Matsumiya;山口芳樹;C.-T.Guo;K.Kato;M.Holland;Y.Yamaguchi;K.Talabnin;Y.Kamiya;S.-J.Yoon;Y.Yamaguchi et al.;M.Holland et al.;Y.Yamaguchi et al.;Y. Kamiya;Y. Kamiya;T.Kimura et al.;H.Yagi et al.;Y.Kamiya et al.;S.Sekiya et al.;N.Takahashi
• 通讯作者: N.Takahashi

抗C-マンノシル化抗体およびその利用

抗C-甘露糖基化抗体及其用途

C-mannosylation, a Novel Type of Glycosylation in Monocyte Differenciation

C-甘露糖基化，单核细胞分化中的一种新型糖基化

• 发表时间: 2005
• 期刊: Glycoconj.J 22
• 作者: E.Muroi;Y.Ihara;S.Manabe;S.Saito;T.Kondo;Y.Ito
• 通讯作者: Y.Ito

Increased expression of protein C-mannosylation in the aortic vessels of diabetic Zucker rats

• DOI: 10.1093/glycob/cwi012
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: GLYCOBIOLOGY
• 影响因子: 4.3
• 作者: Ihara, Y;Manabe, S;Ito, Y
• 通讯作者: Ito, Y

The C-mannosylated Tetrapeptide Modulates Lipopolysaccharide Signaling in Macrophage-like RAW264.7 Cells

C-甘露糖基化四肽调节巨噬细胞样 RAW264.7 细胞中的脂多糖信号传导

• 发表时间: 2005
• 期刊: Glycoconj.J 22
• 作者: Y.Ihara;E.Muroi;S.Manabe;T.Kondo;Y.Ito
• 通讯作者: Y.Ito