魚類の免疫機構に関与するサイトカイン、特にTNFおよびFasリガンドの機能解析

鱼类免疫系统相关细胞因子的功能分析，特别是TNF和Fas配体

• 批准号: 04J12153
• 负责人: 黒部 智史
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo University of Marine Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J12153/
• 关键词: ヒラメ; サイトカイン; TNF; Fasリガンド; アポトーシス; カスパーゼ; 自然免疫; 腫瘍壊死因子; 遺伝子; マイクロアレイ

本年度は、TNFおよびFasの細胞内情報伝達およびアポトーシス誘導に関与するカスパーゼ10遺伝子のクローン化を行なうと共にカスパーゼ10遺伝子発現プラスミドをヒラメ培養細胞へ導入し機能解析を行なった。クローン化したヒラメカスパーゼ10のcDNAは、全長2,282bpで、495アミノ酸残基をコードしていた。ヒラメカスパーゼ10は、2か所のDeath effector domain (DED)ホモロジー領域、LargeサブユニットおよびSmallサブユニットにより構成されていた。ヒラメカスパーゼ10の推定アミノ酸配列は、ヒトカスパーゼ10と全長配列で32.6%、Smallサブユニットで59.8%の相同性を示した。カスパーゼ10遺伝子は、ヒラメの14種類の臓器(脳、眼球、頭腎、心臓、腸、肝臓、筋肉、卵巣、白血球、表皮、脾臓、胃、後腎)の内、鰓、白血球、脾臓および後腎で強い発現を示した。その他にも、頭腎、心臓、腸、表皮および胃において発現がみられた。ヒラメカスパーゼ10のcDNAを真核生物発現用ベクター(pCI-neo vector)に組込んだ。構築した発現プラスミドをトランスフェクション法によりヒラメ胚由来の培養細胞(HINAE)に導入したところ、アポトーシス誘導能が認められた。これらのことより、ヒラメのカスパーゼ10はほ乳類のものと類似のアポトーシス誘導能を有していることが示唆された。

今年，我们克隆了参与TNF和Fas细胞内信号转导和凋亡诱导的caspase 10基因，并将caspase 10基因表达质粒导入培养的牙鲆细胞中进行功能分析。克隆的鲽鱼caspase 10 cDNA全长2,282 bp，编码495个氨基酸残基。比目鱼 caspase 10 由两个死亡效应结构域 (DED) 同源区、一个大亚基和一个小亚基组成。推导的鲽鱼caspase 10氨基酸序列与人caspase 10全长同源性为32.6%，小亚基同源性为59.8%。 caspase-10基因存在于14种器官（脑、眼、头和肾、心脏、肠、肝脏、肌肉、卵巢、白细胞、表皮、脾、胃、后肾）、鳃、白细胞、脾和后肾中。它在肾脏中表现出强烈的表达。在头部和肾脏、心脏、肠、表皮和胃中观察到其他表达。将牙鲆caspase 10的cDNA插入真核表达载体（pCI-neo载体）中。当通过转染将构建的表达质粒导入培养的牙鲆胚胎来源细胞(HINAE)时，观察到诱导细胞凋亡的能力。这些结果表明，比目鱼 caspase 10 具有与哺乳动物类似的诱导细胞凋亡的能力。

项目成果

Expression profiling of immune-related genes from Japanese flounder Paralichthys olivaceus kidney cells using cDNA microarrays

• DOI: 10.1016/j.dci.2004.10.005
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: DEVELOPMENTAL AND COMPARATIVE IMMUNOLOGY
• 影响因子: 2.9
• 作者: Kurobe, T;Yasuike, M;Aoki, T
• 通讯作者: Aoki, T

Expression profiling of immune-related genes from Japanese flounder Paralichthys olivaceus kidney cells using cDNA microarray.

使用 cDNA 微阵列对牙鲆牙鲆肾细胞的免疫相关基因进行表达谱分析。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Development & Comparative Immunology 29
• 作者: Kurobe T;Yasuike M;Kimura Y;Hirono I;Aoki T.
• 通讯作者: Aoki T.