磁気プローブ、及びナノアレイを用いた多サンプル同時検出型イムノアッセイ法の開発

开发使用磁性探针和纳米阵列同时检测多个样品的免疫测定方法

基本信息

批准号：
04J01598
负责人：
新垣篤史
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

生体分子間反応の検出を可能とする磁気バイオ計測技術の開発を目的として、その基礎検討となるナノ磁気微粒子と有機シラン単分子膜被覆基板を用いたビオチン-ストレプトアビジン反応の検出について検討を行った。疎水性単分子膜修飾シリコン基板に対しUVフォトリソグラフィーを用いて5-200μmサイズのドットパターンを作製した。表面にアミノ基を配する単分子膜をドット内に修飾した後、化学架橋反応によりビオチン分子の修飾を行った。一方、粒径200nmのマグネタイト(Fe_3O_4)から成る磁気微粒子表面をアミノ基により被覆した後、ビオチンを修飾し、さらにストレプトアビジンを反応させ、ストレプトアビジン固定化磁気微粒子を作製した。ストレプトアビジン固定化磁気微粒子をビオチン固定化基板上に滴下し、反応を行ったところ、ビオチン-ストレプトアビジン間の特異的反応に由来すると考えられる粒子の固定化が確認された。一方で、ネガティブコントロールとなるアミノ基修飾基板においては、粒子の固定化は確認されなかった。次に、より応用性の高い抗体の磁気微粒子表面への固定化方法について検討を行った。アミノ基、及びチオール基修飾磁気微粒子を調整し、化学架橋反応を利用した抗体の固定化について検討を行った。アミノ基、及びチオール基修飾の確認はFT-IRを用いて行い、それぞれに特異的なピークを観測した。アミノ基修飾磁気微粒子には架橋剤BS3を反応後、抗体を固定化した。チオール基修飾磁気微粒子に対しては架橋剤GMBSを反応後、抗体を固定化した。各種bufferを用いて洗浄後、表面に固定化された抗体量を測定した結果、チオール基修飾磁気粒子に対してGMBSを用いた反応系の方が、アミノ基修飾磁気微粒子に対しBS3を用いた反応と比較し、約2倍量の抗体を固定化することが可能であった。同様に基板上への抗体固定化法についても検討を進めている。

为了开发一种能够检测生物分子反应的磁性生物衡量技术，我们将使用纳米磁性细颗粒和有机硅胶单膜涂层来检测生物素链肽反应的检测。在疏水单膜修饰硅底物上使用紫外线照相创建了5-200μm大小的点图案。在将表面上的氨基组修改为DOT之后，通过化学交联反应进行了生物素分子。另一方面，将磁性细颗粒表面由颗粒直径为200 nm（Fe_3O_4）组成，用氨基涂层，并修改了生物素，并进一步反应了链链球菌的阿比丁，并固定了链链球的阿比丁型磁性氢颗粒被创建了。将链球菌的阿比丁固定磁性颗粒放在生物素固定底物上并反应，并确认被认为是源自生物素链球菌的阿比丁的颗粒被认为是从特定反应中得出的。另一方面，在氨基底板中未确认颗粒的结尾，这是一个阴性对照。接下来，我们检查了将更施加的抗体固定到磁性细颗粒表面的方法。我们调整了氨基组和硫孔碱装饰磁性颗粒，并使用化学交联反应检查了抗体的固定。使用FT-IR进行了氨基组和咀嚼底座装饰的确认，并观察到每个峰。将交联剂BS3与氨基碱装饰磁颗粒反应后，固定抗体。在对硫基碱装饰磁颗粒的交联GMB反应后，固定抗体。使用各种缓冲液清洁后，由于测量了固定在表面上的抗体的量，使用GMB的基于Thioror的装饰颗粒使用BS3进行反应的反应系统与反应相比。修复大约是抗体量的两倍。同样，也考虑了底物上的抗体固定方法。