リアルタイムPCR法を用いた骨浸潤癌の術中迅速診断法に関する基礎研究

实时荧光定量PCR法术中快速诊断骨浸润癌的基础研究

• 批准号: 15791166
• 负责人: 中野 誠
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791166/
• 关键词: リアルタイムPCR; 迅速病理診断; 骨浸潤癌

癌の外科的手術では病変の肉眼的辺縁から経験的安全域を設定し切除する。従来、病変切除断端部における癌細胞残存の有無を確認する目的で軟組織については凍結切片による術中迅速病理診断が行われてきた。しかし、骨浸潤を認める癌では骨組織が切除断端となっているのにも関わらず、現状では経験的な安全域での切除が行われるのみで、癌細胞の有無確認は不可能である。それは硬組織を含む試料では長時間を要する脱灰操作なくしてはミクロトームの刃が立たないため、軟組織と同様の診断法を適応できない事による。癌の浸潤様式は個々様々であるため、現実的には必要以上に広範囲の切除が行われているケースや、取り残しにより再発を認めるケースがある。近年、Polymerase Chain Reaction (PCR)法の普及により、1細胞レベルの微量な核酸を増幅し検出することが可能となり、癌細胞で特異的に発現している遺伝子のmRNAをPCR法を用いて増幅することが可能になった。更にリアルタイムPCR法の開発により迅速性、定量性が向上してきたため、同手法を利用した骨浸潤癌切除断端部における術中迅速診断に関する研究を計画した。本年度はまず(1)担癌マウスの作成と(2)脱灰標本切片によるIn-situ hybridizationによる癌細胞の局在部位同定をする予定としていた。担癌マウスを作成した後にマウス脛骨・大腿骨において規格化された脱灰切片標本を作る必要があった。また、H-E標本とIn-situ hybridization標本の作製を行い状態の良い標本を作るためには新鮮な試料から安定して迅速に作製することが必要であると考えた。そこで本研究では手始めに担癌マウス作成後の試料作製に当り手技の安定化を図るため実験器具の作製を行った。本実験器具の作製はフルヤ工業(株)に依頼して行った。設計・試作まで行った段階の平成15年6月中旬に一身上の都合が生じ、研究継続が困難な状況となったため本研究を中止することとなった。平成15年6月末日付にて当研究施設を辞職することとなったため、今後行う必要があった試作実験器具の評価は、予定していた担癌マウスの作成が未実施であるため未だ出来ない状態で本研究を中断した。

在癌症外科手术过程中，经验安全范围是从病变的毛利率设置和切除的。过去，为了检查癌细胞是否保留在病变边缘，对软组织进行了快速的术中病理诊断。然而，尽管骨骼组织是表现出骨骼侵袭的癌症的切除缘，但目前仅进行了经验安全缘，因此无法确认存在或不存在癌细胞。这是因为如果没有长期的脱矿化操作，含有硬组织的样品就不能具有小型叶片，因此无法应用与软组织相同的诊断方法。由于癌症的入侵模式从一种到另一个不等，因此实际上，在某些情况下，进行更广泛的切除范围，而由于剩余而发生复发的情况。近年来，随着聚合酶链反应（PCR）方法的扩散，可以使用PCR扩增在一个细胞水平下在一个细胞水平上扩增和检测痕量的核酸的痕量核酸。此外，通过开发实时PCR方法，可以提高速度和定量性，并计划使用此技术研究骨入侵性癌症边缘的快速术中诊断。今年，我们计划首先创建含有肿瘤的小鼠，（2）使用脱钙的试样切片通过原位杂交来鉴定癌细胞的局部部位。创建含有肿瘤的小鼠后，必须在小鼠的胫骨和股骨中制成标准化的脱钙截面样本。此外，人们认为，为了准备H-E标本和原位杂交标本，有必要从新鲜的标本中稳定而快速地准备它们。因此，在这项研究中，我们首先在产生肿瘤小鼠后首先准备了样品，并制定了实验设备以稳定该技术。 Furuya Kogyo Co.，Ltd要求该实验设备的生产。这项研究是由于2003年6月中旬的个人原因而取消的，当时设计和原型进行了原型。 2003年6月底，当他从我们的研究机构辞职时，将来对原型实验设备的评估被暂停，因为尚未进行计划的承重小鼠的计划生产。