リアルタイムPCR法を用いた骨浸潤癌の術中迅速診断法に関する基礎研究

实时荧光定量PCR法术中快速诊断骨浸润癌的基础研究

基本信息

批准号：
15791166
负责人：
中野誠
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791166/
关键词：
リアルタイムPCR 迅速病理診断骨浸潤癌

项目摘要

癌の外科的手術では病変の肉眼的辺縁から経験的安全域を設定し切除する。従来、病変切除断端部における癌細胞残存の有無を確認する目的で軟組織については凍結切片による術中迅速病理診断が行われてきた。しかし、骨浸潤を認める癌では骨組織が切除断端となっているのにも関わらず、現状では経験的な安全域での切除が行われるのみで、癌細胞の有無確認は不可能である。それは硬組織を含む試料では長時間を要する脱灰操作なくしてはミクロトームの刃が立たないため、軟組織と同様の診断法を適応できない事による。癌の浸潤様式は個々様々であるため、現実的には必要以上に広範囲の切除が行われているケースや、取り残しにより再発を認めるケースがある。近年、Polymerase Chain Reaction (PCR)法の普及により、1細胞レベルの微量な核酸を増幅し検出することが可能となり、癌細胞で特異的に発現している遺伝子のmRNAをPCR法を用いて増幅することが可能になった。更にリアルタイムPCR法の開発により迅速性、定量性が向上してきたため、同手法を利用した骨浸潤癌切除断端部における術中迅速診断に関する研究を計画した。本年度はまず(1)担癌マウスの作成と(2)脱灰標本切片によるIn-situ hybridizationによる癌細胞の局在部位同定をする予定としていた。担癌マウスを作成した後にマウス脛骨・大腿骨において規格化された脱灰切片標本を作る必要があった。また、H-E標本とIn-situ hybridization標本の作製を行い状態の良い標本を作るためには新鮮な試料から安定して迅速に作製することが必要であると考えた。そこで本研究では手始めに担癌マウス作成後の試料作製に当り手技の安定化を図るため実験器具の作製を行った。本実験器具の作製はフルヤ工業(株)に依頼して行った。設計・試作まで行った段階の平成15年6月中旬に一身上の都合が生じ、研究継続が困難な状況となったため本研究を中止することとなった。平成15年6月末日付にて当研究施設を辞職することとなったため、今後行う必要があった試作実験器具の評価は、予定していた担癌マウスの作成が未実施であるため未だ出来ない状態で本研究を中断した。

在癌症手术中，根据病变的宏观边缘设定经验安全裕度并切除肿瘤。传统上，为了确认病灶手术边缘是否存在残留癌细胞，使用软组织冰冻切片进行快速术中病理诊断。然而，尽管骨组织被用作侵入骨的癌症的手术切缘，但目前仅在经验安全范围内进行切除，并且无法确认癌细胞的存在与否。这是因为切片机刀片无法在不脱钙的情况下站在含有硬组织的样本上，这需要很长时间，因此不能应用相同的软组织诊断方法。由于癌症的侵袭方式因人而异，因此存在进行比实际需要更广泛的切除的情况，以及因残留某些东西而导致复发的情况。近年来，随着聚合酶链式反应（PCR）的普及，在单细胞水平上扩增并检测微量核酸已成为可能，并且现在可以扩增特定基因的mRNA。使用PCR方法在癌细胞中表达成为可能。此外，由于随着实时PCR的发展，快速性和定量性能得到了提高，因此我们计划开展一项利用该方法对骨浸润癌切除边缘进行术中快速诊断的研究。今年，我们计划（1）创建荷瘤小鼠，（2）通过使用脱钙标本切片进行原位杂交来识别局部癌细胞。创建荷瘤小鼠后，需要制备小鼠胫骨和股骨的标准化脱钙切片。此外，为了在良好的条件下制备H-E标本和原位杂交标本，我们认为有必要从新鲜标本中稳定、快速地制备它们。因此，在本研究中，我们首先制作了实验设备，以便在创建荷瘤小鼠后制备样品时稳定程序。该实验设备的制造委托给古屋工业株式会社。 2003年6月中旬，当我们正处于设计和原型阶段时，由于个人情况的原因，难以继续进行研究，所以我们决定终止这项研究。由于我于 2003 年 6 月从该研究机构辞职，因此无法评估未来所需的原型实验设备，因为计划中的荷瘤小鼠尚未创建，这项研究已停止。由于这种情况。