歯髄・歯根膜再生療法を確立するためのin vitroでのエナメル芽細胞の分化誘導

成釉细胞体外分化诱导建立牙髓及牙周膜再生疗法

基本信息

批准号：
15791107
负责人：
諸冨孝彦
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、ラット切歯を形成する上皮細胞群の、幹細胞を含むことが報告されているapical budから摘出した細胞を、単培養および歯乳頭細胞との供培養を行い、未分化エナメル上皮細胞のエナメル芽細胞への分化に歯の間葉細胞がどのような役割を果たすのかを検索し、報告した(Archs Oral Biol. in press : accepted in 2004)。この研究では、apical budの細胞群は単培養では増加が認められず、またエナメル芽細胞の分化マーカーとして用いたameloblastinの発現も、培養期間が10日に達しても認められなかった。一方、歯乳頭細胞との供培養では、細胞数は減少し続けるものの、培養2日目には上皮細胞の半数が内エナメル上皮細胞の分化マーカーであるp75NGFRを発現し始め、培養4日目には上皮細胞中にameloblastinの発現を認め、さらに培養10日目ではほとんどすべての上皮細胞がameloblastinを発現した。他方、内エナメル上皮細胞群を単培養すると細胞は増殖し続け、また培養10日目までにその一部がameloblastinを発現した。歯乳頭細胞との供培養では、細胞数は2日目までは増加するものの、その後は減少した。しかしながらameloblastinを分泌する上皮細胞は増加し、ほとんどすべての上皮細胞がameloblastinを発現するようになった。以上より(1)歯乳頭細胞は未分化エナメル上皮細胞を、内エナメル上皮細胞への分化経路に誘導すること、(2)また、歯乳頭細胞は未分化エナメル上皮細胞の増殖にも必要とされること、(3)内エナメル上皮細胞はすでにそのエナメル芽細胞への分化運命が決定なされており、transit amplifying cellとしての性質を持つこと、(4)歯乳頭細胞は内エナメル上皮細胞の増殖サイクルを止め、エナメル芽細胞への分化を加速させることが示唆された。さらに、昨年度確立し、報告したラット切歯由来組織間細胞様未分化エナメル上皮細胞株HAT-7(J Dent Res. 83:129-133,2004)とラット切歯由来歯髄細胞株RPC-C2A(Kasugai S. et al. Archs Oral Biol. 33,887-891,1988)との供培養を行い、cell lineの細胞でも同様の結果が認められた(投稿準備中)。これらから、実際にin vitroでのエナメル芽細胞誘導の可能性が示され、歯髄・歯根膜再生療法を可能とするエナメル基質タンパクの生成・回収実現への基礎的な知見を得ることができた。

今年，从一组形成大鼠牙的上皮细胞中取出的细胞是单培养并与牙齿乳头细胞培养的，据报道已含有干细胞，这些细胞被搜索，以搜索牙科间充质细胞在分化未分化的搪瓷细胞分化为牙釉质爆炸中的牙齿上的细胞中的作用（Archss blasts and comperts of Costectectect。在这项研究中，在单个培养物中未观察到顶芽细胞的增加，即使在培养期达到10天之后，也没有观察到被用作陶器母细胞的分化标记的杏仁蛋白的表达。 On the other hand, although the number of cells continued to decrease when cultivated with dental papilla cells, half of the epithelial cells began to express p75NGFR, a differentiation marker of internal enamel epithelial cells, and on the fourth day of culture, expression of ameloblastin was observed in the epithelial cells, and on the 10th day of culture, almost all epithelial cells expressed ameloblastin.另一方面，当内搪瓷上皮细胞群是单一培养物时，细胞持续生长，到第10天培养时，其中一些表达了氨基蛋白细胞蛋白。在用牙乳状细胞培养的情况下，细胞数量增加到第二天，但此后减少。然而，分泌蛋白细胞蛋白的上皮细胞数量增加，几乎所有上皮细胞均表达蛋白细胞蛋白。 These results suggest that (1) dental papilla cells induce undifferentiated enamel epithelial cells in the differentiation pathway into internal enamel epithelial cells, (2) dental papilla cells are also required for the proliferation of undifferentiated enamel epithelial cells, (3) internal enamel epithelial cells have already been determined to differentiate into enamel blasts, and have the properties of transit amplifying cells, and （4）牙齿乳头细胞阻止内牙釉质上皮细胞的增殖周期，并加速分化成搪瓷爆炸。此外，大鼠切口衍生的组织间细胞样未分化的搪瓷上皮细胞系HAT-7（J DentRes。83：129-133,2004）和大鼠切可能的纸浆细胞系RPC-C2A RPC-C2A RPC-C2A（Kasugai S.线（准备发布）。这些表明了实际诱导体外诱导搪瓷细胞的可能性，并且我们能够获得有关牙釉质底物蛋白的生产和恢复的基础知识，这些蛋白质能够实现牙髓和牙周韧带再生疗法。