細胞外基質代謝からみたミュラー細胞の生物学的作用

从细胞外基质代谢角度探讨Müller细胞的生物学效应

基本信息

批准号：
15791013
负责人：
植木麻理
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

平成17年度、豚眼を半切し感覚網膜を剥離除去した後、0.1%トリプシン+0.2%ヒアルロニダーゼ+4%チキンシラーム液で45分間インキュベートした。20%FBS+DMEM+HamF12培養液を適量添加した上でホモゲネートし培養を行った。継代培養を繰り返し、抗glutamine synthetase抗体、抗GFAP抗体を用いた免疫染色を行い、本培養系がミュラー細胞であることを確認した。培養細胞をKobayashiらの方法(J Immunoassay, 2000)でマイクロプレートに固相化し、酵素免疫法によりミュラー細胞に発現しているコラーゲンの解析を行った。また培養上清に含まれるコラーゲンについても、マイクロプレートのウェル上に培養上清をコーティングし、乾燥後、酵素免疫法により解析を行った。その結果、培養細胞、培養上清ともに、V型コラーゲンの発現がみられた。I型コラーゲンの発現も僅かながら認められた。増殖糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、黄斑円孔、黄斑上膜に対する網膜硝子体手術で得られた硝子体液中に発現しているコラーゲンタイプを、マイクロプレートのウェル上に硝子体液をコーティングし、乾燥後、酵素免疫法により定量することにより調べた。通常、生理的な状態で発現が多く見られるII型コラーゲンの割合が、増殖糖尿病網膜症では他の疾患に比較して減少していることが示された。

在2005年，猪的眼睛被切开并去除感觉视网膜，然后与0.1％胰蛋白酶 + 0.2％透明质酸酶 + 4％鸡肉Syram溶液一起孵育45分钟。加入了适当量的20％FBS+DMEM+HAMF12培养物，并将混合物匀浆和培养。使用抗谷氨酰胺合成酶抗体和抗GFAP抗体对亚培养物重复并进行免疫染色，以确认主要培养系统是Muller细胞。使用Kobayashi等人的方法将培养的细胞固定在微板上。（J Immunoasle，2000年）和在Muller细胞中表达的胶原蛋白通过酶免疫学分析。培养上清液中包含的胶原蛋白还涂有微板孔上的培养上清液，由酶免疫测定法干燥和分析。结果，在培养的细胞和培养物上清液中都观察到V型胶原蛋白的表达。还观察到少量的I型胶原蛋白表达。通过视网膜玻璃体手术获得的胶原蛋白类型，通过在微磷酸盐的井上涂上玻璃体，干燥，并通过enzyme-ememe-emunososupsression量化它们，从而检查了通过视网膜玻璃体手术，用于增生性糖尿病性视网膜病，糖尿病性黄斑水肿，黄斑孔和表皮膜。已经表明，与其他疾病相比，在生理条件下通常更常见的II型胶原蛋白的比例降低了。