ヒト卵子特異的ヒストンH1の同定および受精過程における機能解析

人类卵子特异性组蛋白H1的鉴定及其在受精过程中的功能分析

基本信息

批准号：
15790908
负责人：
田中雄大
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790908/
关键词：
受精核タンパクヒストンマウス卵子

项目摘要

1.ヒト単一卵子からRNAを抽出する方法を確立した。2.マウス卵子特異的ヒストンH1(H1oo)と相同性の高い遺伝子配列をデータベースから推測し、ここからプライマーを作成した。3.このプライマーを用いて、ヒト単一卵子からRT-nested PCRを行い、得られたPCR産物の塩基配列を解析することによって1041bpのopen reading frameを持つcDNAを同定した。4.このcDNAから推測されたアミノ酸配列に対して、データベースからhomology解析を行なった。その結果、このアミノ酸配列は他動物種の卵子特異的ヒストンH1ときわめて相同性が高く、更に内部にcentral globular domainといわれる卵子特異的ヒストンH1に共通の構造を有していることが分かった。5.RT-nested PCRによって、このcDNAはヒト各種臓器(肺、肝臓、乳房、脾臓、腎臓、小腸・筋肉組織、リンパ球)には存在しないことを確認した。6.以上よりこのcDNAはヒト卵子特異的ヒストンH1であると考えられ、これをhuman oocyte specific histone H1 : osH1と命名し、GeneBankに登録するとともに、別記の如く、学会誌に発表した。7.osH1全長のうち、30アミノ酸残基をepitopeとして家兎より、抗osH1 polyclonal antibodyを作成した。8.このpolycolona抗体を用いて、ヒト卵子およびヒト卵巣に対して免疫組織染色を行い、osH1タンパクの卵子特異的発現を確認した。9.現在、ヒト単一卵子中のosH1 mRNAの定量化を検討中である。

1. 我们建立了一种从单个人类卵子中提取 RNA 的方法。 2.从数据库中推断出与小鼠卵母细胞特异性组蛋白H1（H1oo）高度同源的基因序列，并由此创建引物。 3. 使用这些引物，我们对单个人卵进行了 RT 巢式 PCR，通过分析所得 PCR 产物的碱基序列，我们鉴定了具有 1041 bp 开放阅读框的 cDNA。 4.从数据库中对该cDNA推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果发现，该氨基酸序列与其他动物物种的卵母细胞特异性组蛋白H1具有极高的同源性，并且还具有卵母细胞特异性组蛋白H1共有的内部结构，称为中央球状结构域。 5. RT-巢式PCR证实该cDNA不存在于多种人体器官（肺、肝、乳腺、脾、肾、小肠/肌肉组织、淋巴细胞）中。 6. 综上所述，该cDNA被认为是人卵母细胞特异性组蛋白H1，我们将其命名为人卵母细胞特异性组蛋白H1：osH1，在GeneBank中注册，并如别处所述在学术期刊上发表。 7.以全长osH1的30个氨基酸残基作为表位，从兔体内制备了抗osH1多克隆抗体。 8. 使用该多克隆抗体，对人卵和人卵巢进行免疫组织学染色，证实了 osH1 蛋白的卵母细胞特异性表达。 9.目前，我们正在研究单个人类卵母细胞中 osH1 mRNA 的定量。