転写因子CREBを標的とした関節リウマチ制御の基礎的検討

靶向转录因子CREB调控类风湿性关节炎的基础研究

基本信息

批准号：
15790196
负责人：
石津明洋
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトT細胞白血病ウイルスI型(HTLV-I)のLTR-env-pX遺伝子を導入したトランスジェニックラット(env-pXラット)はヒト関節リウマチ(RA)類似の関節炎を発症する。本研究ではenv-pXラットの関節炎病態に導入遺伝子を発現する滑膜組織が重要な役割を果たしていることを明らかにした。ヒトRAにおいても、滑膜の増殖や同細胞が産生するIL-6、IL-8などの炎症性サイトカインが病態に深く関わっている。本研究では、RAの分子制御を目的として、滑膜細胞の増殖や炎症性サイトカイン産生を転写レベルで制御するCREBに注目した。CREBはロイシンジッパー構造をもつ転写因子で、同じ分子ファミリーに属するATF-1と二量体を形成して標的となるDNA塩基配列に結合し、遺伝子転写活性を発揮する。そこで、CREBを競合的に阻害するDominant Negative ATF-1(ATF-1DN)を作製し、env-pXラット由来の関節滑膜細胞に遺伝子導入して、CREBにより転写調節される細胞周期関連分子や炎症性サイトカインの発現変化を検討した。細胞周期関連分子ではcyclin Dには明らかな変化はなかったが、ATF-1DNの導入によりCDK4の発現が減少した。炎症性サイトカインではIL-8ファミリーのGroには変化がなかった一方、IL-6の発現が減少した。また、生体内におけるATF-1DNの関節炎治療効果を検証する目的で、シンビスウイルスベクターにATF-1DN遺伝子を組み込み、腫脹したenv-pXラット足関節に注射した。対照にはlacZ遺伝子を組み込んだベクターを用いた。ATF-1DNの遺伝子導入により、env-pXラット関節炎の抑制傾向が肉眼的並びに組織学的に確認された。以上より、ATF-1DNの遺伝子導入により、滑膜細胞の増殖やIL-6産生が抑制され、RAの治療につながる可能性が示唆された。

导入了人类T细胞白血病病毒I型(HTLV-I)的LTR-env-pX基因的转基因大鼠(env-pX大鼠)会发展出与人类类风湿性关节炎(RA)类似的关节炎。在这项研究中，我们揭示了表达转基因的滑膜组织在 env-pX 大鼠关节炎的发病机制中发挥着重要作用。在人类 RA 中，滑膜增殖和这些细胞产生的炎症细胞因子（例如 IL-6 和 IL-8）与病理密切相关。在本研究中，我们关注 CREB，它在转录水平上控制滑膜细胞增殖和炎症细胞因子的产生，目的是对 RA 进行分子控制。 CREB是一种具有亮氨酸拉链结构的转录因子，与同属分子家族的ATF-1形成二聚体，与靶DNA碱基序列结合，发挥基因转录活性。因此，我们创建了竞争性抑制 CREB 的显性阴性 ATF-1 (ATF-1DN)，并将该基因导入 env-pX 大鼠的关节滑膜细胞中，研究了炎症细胞因子表达的变化。细胞周期相关分子中，cyclin D没有明显变化，但ATF-1DN的引入降低了CDK4的表达。炎症细胞因子方面，IL-6的表达下降，而IL-8家族成员Gro的表达没有变化。此外，为了在体内验证ATF-1DN对关节炎的治疗效果，将ATF-1DN基因插入Cymbis病毒载体中并注射到肿胀的env-pX大鼠踝关节中。掺入 lacZ 基因的载体用作对照。通过 ATF-1DN 基因转移在宏观和组织学上证实了 env-pX 大鼠抑制关节炎的趋势。上述结果表明ATF-1DN基因转移抑制滑膜细胞增殖和IL-6产生，这可能导致RA的治疗。