哺乳動物における相同組み換えタンパク(RAD51)の分子機能の解析

哺乳动物同源重组蛋白（RAD51）的分子功能分析

基本信息

批准号：
15770113
负责人：
吉田佳世
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770113/
关键词：
相同組換え Rad51遺伝子放射線感受性細胞増殖

项目摘要

生物を取り巻く環境の中には、電離放射線、紫外線のようなDNAに損傷を及ぼす変異原が存在するため、生物には遺伝情報を安定に保持する機構が備わっている。特に、DNA二重鎖切断を受けたときに、もう一方の相同なDNAを鋳型として組換えにより修復する相同組換えは、遺伝情報の正確な維持だけでなく、減数分裂期における遺伝的多様性の形成にも重要な役割を果たしていると考えられる。このような相同組換えに関与する遺伝子として、真核生物には大腸菌RecA遺伝子のホモログであるRad51遺伝子が存在する。近年、RAD51タンパクは癌抑制遺伝子産物や細胞周期チェックポイントタンパクと結合していることが明らかになり、哺乳動物細胞の組換えタンパクには、DNAが二重鎖切断を受けた場合、組換え修復を行うと同時に、細胞そのものの増殖を停止し個体を守る機能があると考えられる。Rad51遺伝子は、細胞増殖に必須であるため、Rad51遺伝子をテトラサイクリン依存性に発現制御できるターゲティングベクターを構築し、ターゲティングベクターをマウスES細胞及びF9細胞に導入し、ヘテロの相同組換え体を得た。内在性Rad51遺伝子の発現をドキシサイクリンにより抑制できることをノーザン、ウェスタン法で確認した。さらに、ヘテロの相同組換え体(ES細胞)からキメラマウスを作製したが、germ lineキメラは得られなかった。そこで、ピューロマイシン耐性遺伝子を含むターゲティングベクターを新たに構築した。現在、このターゲティングベクターをヘテロの相同組換え体に導入し、ホモの相同組換え体を作成中である。今後、ホモの相同組換え体を用いて、外部から種々の変異RAD51組換えタンパクを導入することにより、放射線感受性、細胞増殖性などの影響を解析し、必要なドメインを決定する予定である。

在生物周围的环境中，有一个突变体对DNA造成损害，例如离子辐射和紫外线，因此生物体具有稳定遗传信息的机制。特别是，当DNA双链断开时，通过重组作为模具来修复的同源重组不仅可以准确地维持遗传信息，而且还可以在降低时期内进行遗传多样性。在形成中的作用。作为参与这种均质重组的基因，天然生物具有rad51基因，rad51基因是大肠杆菌基因的同源物。近年来，已经揭示了Rad51蛋白已与癌症抑制基因产物和细胞周期检查点蛋白结合使用，如果DNA是哺乳动物动物细胞的重组蛋白的DNA，则是同时恢复。认为有一种功能可以阻止细胞本身的生长并保护个体。由于Rad51基因对于细胞增殖至关重要，因此可以在四循环依赖性上控制Rad51基因的靶向载体，因此已将靶向载体引入了小鼠ES细胞和F9细胞，并获得了异性恋。北部和西方方法证实，内部rad51基因的表达可以被Doxys Cyclin抑制。此外，从异临床重组（ES细胞）产生嵌合体小鼠，但没有获得生殖系嵌合体。因此，新构建了一种新的含有毒素抗毒素基因的靶向载体。目前，该靶向载体已被引入异性同源重组机构，并创建了同型重组体。将来，通过使用HOMO同源重组引入各种突变体Rad51重组蛋白，可以通过分析辐射敏感性和细胞增殖的影响来确定必要的域。