タイトジャンクション構成タンパク質クローディンの動態についての解析

紧密连接组成蛋白claudin的动力学分析

基本信息

批准号：
03J61551
负责人：
松田美穂
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

タイトジャンクション(TJ)は上皮細胞に特有の細胞間接着装置の1つである。本研究ではTJストランドの主要構成要素であるクローディンの動態を生細胞を用いて解析し、細胞運動に伴うTJのダイナミックな動的制御機構の解明を目的としている。昨年度の研究によって、上皮細胞シートの動きに伴ってクローディンが他のTJ構成因子とは異なる動態を示すことを明らかとした。本年度は、このような挙動を制御している分子メカニズムの詳細を明らかにすることを目標とした。細胞接着部位には多くのタンパク質が局在している事が報告されているが、そのあまりの複雑さ故に得られる知識は断片的である。昨年度より緑色蛍光タンパク質との融合タンパク質を用い、様々な細胞接着部位に存在するタンパク質の動態を観察する過程の中で、システムとして生細胞でのタンパクの動態を観察する系を立ち上げてきた。その観察系をさらに発展させ、細胞接着部位に存在するタンパク質を網羅的に同定するスクリーニング系を確立し、細胞間接着を包括的に理解する第一歩とする事を試みた。その結果、細胞内アクチン骨格を制御する因子や、神経終末に局在が報告されている因子、特定の一群の上皮細胞、内皮細胞の細胞接着部位にのみに存在する因子などを新たに同定する事ができた。今後さらに新たな因子の同定を試みるとともに、それらがTJの動的制御にどのような影響を及ぼすかについて、解析を進めたい。

紧密连接（TJ）是上皮细胞独有的细胞间接粘附之一。在这项研究中，使用活细胞分析了Crodin的动力学，即TJ链的主要成分，旨在阐明与细胞运动相关的TJ动态控制机制。去年的研究表明，Crodin显示出与其他TJ配置不同的动力学，并具有上皮细胞表的运动。今年，目标是阐明控制这种行为的分子机制的细节。据报道，许多蛋白质都位于细胞胶中，但是由于过多的复杂性而获得的知识是零散的。自去年以来，在观察各种细胞粘合剂位点中存在的蛋白质动力学的过程中，使用带有绿色荧光蛋白的融合蛋白，它已启动了一个系统，可以观察活体细胞中的体内动力学。观察系统已经进一步开发，建立了一个筛选系统，该系统全面识别了细胞粘附中存在的蛋白质，并全面理解了细胞粘附。结果，控制细胞内肌动蛋白骨骼的因素，在神经末尾报告的因素，特定组的上皮细胞以及仅在内皮细胞的细胞粘附位点存在的因子新鉴定出来。我能够做到这一点。将来，我们将尝试确定新因素，并分析它们如何对TJ进行动态控制。