ツメガエルの細胞接着と受容体に関する分子生物学的研究

非洲爪蟾细胞粘附和受体的分子生物学研究

基本信息

批准号：
03J11882
负责人：
乾雅史
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J11882/
关键词：
apelin msr fli 血管血球心筋ツメガエル受容体 OMP25 アフリカツメガエル OMP25蛋白質神経形成

项目摘要

私はDNAマイクロアレイの手法を用いてアフリカツメガエルの循環器系組織において発現する新規遺伝子を探索した。Stage 12.5(後期原腸胚)、20(後期神経胚)、26(尾芽胚)のツメガエル胚を外科的に予定心臓血管領域とそれ以外に切り分け、それぞれからRNAを抽出してプローブを作成した。これらのプローブを我々の研究室でデザインされたXenopus 8kマイクロアレイにハイブリダイズさせて遺伝子の発現を比較した結果、予定心臓血管領域における発現量がそれ以外の領域よりも2倍以上高い遺伝子を172見出し、そのうち既知の配列との相同性の低い15遺伝子の部分配列を単離した。Whole-mount in situ hybridization(WISH)法によりそれらの遺伝子の発現領域を検討した結果、そのうち3遺伝子が発生過程の循環器系の組織で明らかな発現を示した。この3遺伝子の中の一つについて、私はその幼生期における発現パターンからAmiと命名し、詳細な発現パターンと発生における役割について解析した。Amiの予想アミノ酸配列はヒトComplement Factor D、マウスAdipsinと約47%及び42%の相同性を示したが、ツメガエル成体におけるAmi mRNQの発現にはこれら哺乳類ホモログの発現と異なる点が観察されたため、これらが相同遺伝子であるかを結論するには蛋白質機能の比較など更なる検証が必要である。発生過程のAmiのmRNAは神経胚の前方腹側及び沿軸領域、尾芽胚期の前方腹側領域に発現し、幼生期には形成過程の血管に沿った発現が観察された。この幼生期の血管に沿った発現はこれまでに知られているいずれのマーカー遺伝子よりも明瞭であり、この遺伝子の発現パターンから血管形成の前方から後方への経時的な進行や、腹側における左右非対称性を観察することができた。

我使用 DNA 微阵列技术来寻找非洲爪蟾循环系统组织中表达的新基因。通过手术将 12.5 期（原肠胚晚期）、20 期（神经胚晚期）和 26 期（尾芽）的非洲爪蟾胚胎切成预期的心血管区域和其余部分，并从每个区域提取 RNA 以创建探针。将这些探针与我们实验室设计的爪蟾 8k 微阵列杂交并比较基因表达，我们发现 172 个基因在预期的心血管区域中的表达水平是其他区域的两倍以上，我们分离了 15 个基因的部分序列。与已知序列同源性较低的基因。使用整体原位杂交（WISH）检查这些基因的表达区域，结果发现其中三个在发育过程中在循环系统组织中显示出清晰的表达。我根据这三个基因之一在幼虫阶段的表达模式将其命名为Ami，并分析了其详细的表达模式和在发育中的作用。预测的 Ami 氨基酸序列与人补体因子 D 和小鼠 Adipsin 具有约 47% 和 42% 的同源性，但观察到成年爪蟾中 Ami mRNQ 的表达与这些哺乳动物同源物的表达不同，需要进一步验证如比较。需要对蛋白质功能进行分析才能断定这些基因是否是同源基因。在发育过程中，Ami mRNA在神经胚的前腹侧和近轴区、尾芽期的前腹侧表达，在幼虫期沿形成的血管观察到表达。该基因在幼虫阶段沿血管的表达比任何先前已知的标记基因都更清晰，并且该基因的表达模式表明可以观察到血管形成从前到后和腹侧的时间进展。