色素体核様体の構造を介した機能統御の研究

通过质体核仁结构进行功能控制的研究

基本信息

批准号：
03J05869
负责人：
関根康介
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

色素体DNAは多くのタンパク質と核様体と呼ばれる複合体を形成するが,その主要タンパク質の一つとして亜硫酸還元酵素(SiR)が同定されている。しかしこれまでSiRは葉緑体の可溶性画分に酵素活性があることからストロマに局在すると考えられてきた。本研究の目的はSiRのDNA結合能と酵素としての機能の関係を解明することである。昨年度までに,エンドウSiRcDNAの塩基配列を決定し,それをもとに作成した組換えタンパク質にDNA結合能があることを確認した。平成16年度は,SiRのDNA結合能を詳細に解析するために、決定したエンドウSiRのcDNA塩基配列をもとに大量の組換えタンパク質の作成を試みた。SiRはフェレドキシンと親和性があるため,フェレドキシン-アフィニティクロマトグラフィにより精製を行った。すでにトウモロコシ等のSiRについては確立された精製法であるが,エンドウSiRでは精製過程での挙動が異なり,収率も非常に低かった。わずかに得られた組換えエンドウSiRについて吸光分光分析を行ったところ,SiRが持つ補欠分子族固有のスペクトルが得られた。また,ストロマと核様体のそれぞれに局在するSiRについて分子構造の観点から比較した。質量分析法を行ったところ,両者で分子量が異なるという結果が得られたが,葉緑体全体について分析を行ったところ,異なる分子量のSiRは検出されなかった。したがって両者の分子量の違いは試料調整の操作中に生じた可能性があり,今後更なる検討が必要である。

塑料DNA形成具有许多蛋白质的称为核苷的复合物，主要蛋白质之一是亚硫酸盐还原酶（SIR）。但是，到目前为止，已经考虑到SIR位于基质中，因为它在叶绿体的可溶性部分中具有酶活性。这项研究的目的是阐明SIR的DNA结合能力与其作为酶的功能之间的关系。到去年，确定了豌豆sircdna的基础序列，并证实基于IT产生的重组蛋白具有DNA结合能力。 2004年，为了详细分析SIR的DNA结合能力，我们试图根据确定的PEA SIR的cDNA碱基序列创建大量的重组蛋白。由于SIR与铁氧还蛋白具有亲和力，因此通过铁蛋白 - 亲密色谱法纯化。尽管已经建立了诸如玉米之类的先生，但纯化方法在豌豆sir的纯化过程中有所不同，产量非常低。对稍微获得的重组豌豆SIR进行了分光光度法分析，并获得了特定于SIR的假体组的光谱。此外，从分子结构的角度比较了基质和核酸核酸核酸核的爵士。质谱法表明两者之间的分子量不同，但是当分析整个叶绿体时，未检测到具有不同分子量的SIR。因此，两者之间的分子量差异可能在样本制备过程中发生，并且将来需要进一步研究。