レチノイドによる血管内皮前駆細胞の血管形成制御機構の解明

阐明类维生素A控制血管内皮祖细胞血管生成的机制

• 批准号: 14770345
• 负责人: 鈴木 康弘
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770345/
• 关键词: 血管形成; レチノイド; 血管内皮前駆細胞; 漿尿膜; Flk-1; 血管リモデリング; angiopoietin; 遺伝子発現; 奬尿膜; 平滑筋型α-アクチン

1.レチノイド刺激したニワトリ胚漿尿膜におけるangiopoietin-2遺伝子発現変化:マイクロダイセクション法によって、漿尿膜の微少血管層からRNAを回収し、RT-PCR及び定量PCRを行った。その結果、未刺激の微少血管層と比較すると、レチノイド処理した微少血管層では、angiopoietin-2の遺伝子発現が促進することがわかった。対照的に、レチノイドアンタゴニストを処理することによって、内在性のレチノイドの作用をブロックした微少血管層では、angiopoietin-2遺伝子の発現が抑制された。2.レチノイドの血管形成抑制効果におけるangiopoietinの関与:レチノイドの血管形成抑制効果は、微少血管のネットワーク形成(特に血管の分岐)の抑制が特徴的である。この抑制効果は、レチノイドとangiopoietin-1の同時添加により緩和されることがわかった。また、angiopoietin-2を処理することによって、レチノイドの血管形成抑制効果が擬似されることを見出した。3.血管前駆細胞のin vivo血管形成に対するレチノイドの影響:現在、X線照射して骨髄が破壊されたマウスにGFP発現マウスの骨髄を移植し、既存の血管細胞と骨髄由来血管前駆細胞(GFP発現)によるin vivo血管形成に対するレチノイドの影響を解析している。4.レチノイドによるangiopoietin-2遺伝子の発現調節:RT-PCR及び定量PCRの結果から、レチノイドは血管前駆細胞におけるangiopoietin-2遺伝子の発現を促進するが、成熟(既に分化した)内皮細胞・壁細胞における発現には影響を与えないことがわかった。現在、angiopoietin-2遺伝子のプロモーター領域のクローニングを終え、ルシフェラーゼアッセイにて、レチノイド応答に必要とされる領域の同定を試みている。

1.类维生素A刺激鸡胚绒毛尿囊膜中angiopoietin-2基因表达的变化：通过显微切割从绒毛尿囊膜微血管层收集RNA，并进行RT-PCR和定量PCR。结果表明，与未刺激的微血管层相比，经类视黄醇处理的微血管层中血管生成素-2的基因表达得到促进。相比之下，血管生成素-2基因表达在微血管层受到抑制，用类维生素A拮抗剂治疗可阻断内源性类维生素A的作用。 2.血管生成素参与类维生素A的血管生成抑制作用：类维生素A的血管生成抑制作用的特点是抑制微血管网络形成(特别是血管分支)。发现同时添加类维生素A和血管生成素-1可以减轻这种抑制作用。我们还发现，类视黄醇的抗血管生成作用可以通过血管生成素-2 治疗来模拟。 3.类视黄醇对血管祖细胞体内血管生成的影响：目前将表达GFP的小鼠骨髓移植到骨髓已被X射线照射破坏的小鼠体内，现有的血管细胞和骨髓来源的血管祖细胞细胞（GFP，我们正在通过表达分析类维生素A对体内血管生成的影响）。 4、类维生素A对血管生成素2基因表达的调节：从RT-PCR和定量PCR的结果来看，类维生素A促进血管祖细胞中血管生成素2基因的表达，但不促进成熟（已分化）内皮细胞和壁细胞中血管生成素2基因的表达。发现对表达没有影响。目前，我们已经完成了血管生成素-2基因启动子区域的克隆，并正在尝试使用荧光素酶测定来鉴定类维生素A反应所需的区域。

项目成果

Okuno, M., et al.: "Retinoids in Liver Fibrosis and Cancer"Frontiers in Bioscience. 7. D204-D218 (2002)

Okuno, M., et al.：“类维生素A在肝纤维化和癌症中的作用”生物科学前沿。

Akita, K., et al.: "Impaired liver regeneration in mice by lipopolysaccharide via TNF-α/kallikrein-mediated activation of latent TGF-β"Gastroenterology. 123(1). 352-364 (2002)

Akita, K. 等人：“脂多糖通过 TNF-α/激肽释放酶介导的潜在 TGF-β 激活损害小鼠肝脏再生”Gastroenterology 123(1)。