アセトアルデヒド脱水素酵素欠損マウスを用いた行動・神経毒性の遺伝子発現変化の解析

使用乙醛脱氢酶缺陷小鼠分析行为和神经毒性基因表达变化

• 批准号: 14770154
• 负责人: 一瀬 豊日
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770154/
• 关键词: アセトアルデヒド; アルデヒド脱水素酵素2; アルコール嗜好性; エタノール; 遺伝子多型; マイクロアレイ法; 遺伝子発現; 視床下部; アルデヒド脱水素酵素; ノックアウトマウス

(1)エタノール強制経口投与後の臓器中エタノールおよびアセトアルデヒド濃度測定Aldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに0.1,0.5,1.0,2.0および5.0g/kg体重の20%エタノールを経口投与し、1時間後の血液中のエタノールおよびアセトアルデヒド濃度を各群6匹について測定した。エタノール濃度に有意な差は認められなかったが、Aldh2-/-マウスの臓器中アセトアルデヒド濃度は3-30倍の高値を示した。(学術誌投稿中)(2)アセトアルデヒド2週間連続吸入曝露したマウス視床下部のマイクロアレイ解析われわれは既にAldh2-/-マウスがAldh2+/+マウスに比べエタノールを好まないことを報告している。エタノール嗜好性を低下させる内因性の機序を解明するためマイクロアレイ解析を実施した。エタノール投与による食餌状態の変化を避け、エタノールによる毒性とアセトアルデヒドによる毒性の別を区別するために、2週間連続アセトアルデヒド500ppm吸入曝露を実施した。この結果、Aldh-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに血中アセトアルデヒド濃度数マイクロモルの状態を得ることが出来た。これは慢性アルコール中毒患者における血中アセトアルデヒド濃度に等しい。この慢性アルコール中毒状態の血中アセトアルデヒド濃度にあるときのAldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスの視床下部を用いて、遺伝子発現の網羅的解析をマイクロアレイ法を実施した。この結果、アセトアルデヒド曝露に関係なくAldh2-/-マウスとAldh2+/+マウスで発現が異なる遺伝子、アセトアルデヒド曝露によりAldh2-/-マウスとAldh2+/+マウスで発現が異なってくる遺伝子の候補を見出した。現在データ解析中であり、定量PCR法で追実験を実施している。

(1)强制口服乙醇后器官中乙醇和乙醛浓度的测量将0.1、0.5、1.0、2.0和5.0g/kg体重的20％乙醇口服给予Aldh2-/-小鼠和Aldh2+/+小鼠。数小时后测量每组 6 只动物的血液中乙醇和乙醛浓度。尽管乙醇浓度没有观察到显着差异，但Aldh2-/-小鼠器官中的乙醛浓度高出3-30倍。 （提交给学术期刊）（2）吸入乙醛2周的小鼠下丘脑的微阵列分析我们已经报道，与Aldh2+/+小鼠相比，Aldh2-/-小鼠不喜欢乙醇。进行微阵列分析以阐明减少乙醇偏好的内源机制。为了避免因服用乙醇而改变饮食状态，并区分乙醇引起的毒性和乙醛引起的毒性，我们连续吸入暴露于 500 ppm 的乙醛两周。结果，我们能够获得Aldh-/-小鼠和Aldh2+/+小鼠的血液乙醛浓度为几微摩尔。这相当于慢性酗酒者血液中乙醛的浓度。我们利用血液乙醛浓度处于慢性酒精中毒状态时的Aldh2-/-小鼠和Aldh2+/+小鼠的下丘脑，采用微阵列方法进行了基因表达的综合分析。结果，我们发现了无论乙醛暴露如何在Aldh2-/-和Aldh2+/+小鼠中差异表达的基因的候选基因，以及由于乙醛暴露而在Aldh2-/-和Aldh2+/+小鼠中差异表达的基因。我们目前正在分析数据并使用定量 PCR 进行后续实验。